Valutazione dell’espressione di microRNA (miRNA 126, miR-15, miR-16, miR-20) correlati con le vie del Vascular endothelial growth factor (VEGF) nei tumori perivascolari del cane al fine di identificare possibili interferenze epigenetiche alla base dell’alterata espressione dei fattori di crescita in queste neoplasie
Progetto INTRODUZIONE: i tumori perivascolari (TPV) sono sarcomi che originano dalle cellule murali dei vasi. In una casistica preliminare di TPV canini è stata riscontrata un'anomala espressione di fattori pro- e anti-angiogenici correlati a pathway autocrine e paracrine di controllo della proliferazione cellulare. L’ipotesi è che l’elevata pressione idrostatica vascolare stimoli l'anomala espressione di VEGF e dei suoi recettori con conseguente selezione di cloni di cellule Flk1 positive che acquistano indipendenza dai sistemi di controllo della crescita con successiva trasformazione neoplastica. I microRNA (miRNA) sono RNA non codificanti che regolano la traduzione dell'RNA messaggero tramite un controllo postrascrizionale dell’espressione dei geni target. Il ruolo dei miRNA nel controllo dell’espressione di VEGF è stato documentato(4). Nell’uomo sono stati identificati miRNA con azione proangiogenica intratumorale (miR 19-92) ed antiangiogenica (miR-15,-16,-20). Inoltre, pattern specifici di espressione di miRNA sono stati correlati a istotipi precisi di sarcomi umani(4).
IPOTESI: il riscontro di un’anomala espressione di VEGF, Flk1 e Flt1 nei TPV potrebbe derivare da un controllo epigenetico postrascrizionale miRNA mediato.
METODI: verranno inclusi casi di TPV di cani, previa analisi tomografica preoperatoria per ottenere indicazioni sul corretto approccio chirurgico. Sui tessuti tumorali saranno eseguiti:
-Istologia
-Immunoistochimica (anti-VEGF,Flk1,Flt1)
-Real time PCR con primer per miRNA (miR-126, miR-15, miR-16, miR-20a, miR-20b) che hanno come target sequenze di mRNA codificanti per VEGF, Flk1 e Flt1
-Western blotting semiquantitavo per VEGF, Flk1 ed Flt1
I livelli d’espressione proteica e di miRNA saranno confrontati e i dati analizzati statisticamente.
RISULTATI ATTESI: si prevede di:
-Confermare l’ipotesi patogenetica, evidenziando un pattern d’espressione di miRNA correlato ad anomala espressione di VEGF e dei suoi recettori nei TPV
-Identificare una correlazione tra pattern d’espressione dei miRNA ed istotipi di TPV
-Fornire la base molecolare per la terapia farmacologica antiangiogenica mirata ad inibire il pathway specifico del VEGF nei TPV
FATTIBILITA’: esiste una solida collaborazione tra i partecipanti al progetto e con le sezioni di Chirurgia e Parassitologia (metodica miRNA). Ogni unità ha un ruolo tecnico consolidato.
ORIGINALITA’: mancano lavori in merito a miRNA, angiogenesi e TPV. Nel cane, studi d’espressione di miRNA riguardano tessuti normali e tumori mammari(2,3).
BIBLIOGRAFIA
1 Avallone et al.Immunoistochemical expression of VEGF, Flk1 and CTGF in canine perivascular wall tumors. Proc 26th meeting of ESVP, Krakow-Poland 9-13 Sept 2009
2 Boggs R et al.Identification, amplification and characterization of miR-17-92 from canine tissue.Gene404:25,2007
3 Boggs R et al.MicroRNA expression in canine mammary cancer.Mamm Genome19:561,2008
4 Suárez Y.MicroRNAs as novel regulators of angiogenesis.Circ Res104:442