Espressione dei recettori Toll-like durante lo sviluppo embrionale del sistema nervoso enterico murino.
Progetto Il Sistema Nervoso Enterico (SNE) è formato da una rete di neuroni e cellule gliali immersa nella parete del tratto gastrointestinale. Le sue funzioni più note consistono nella regolazione della motilità intestinale, della secrezione elettrolitica, della secrezione esocrina ed endocrina e del flusso sanguigno. Inoltre, negli ultimi anni, numerose ricerche hanno evidenziato come il SNE ricopra anche un ruolo fondamentale nella modulazione dei meccanismi di difesa della parete intestinale, partecipando alle risposte infiammatorie ed immunitarie. A questo riguardo, sono stati parzialmente pubblicati dati che dimostrato che i neuroni enterici esprimono i recettori Toll-like che riconoscono componenti altamente conservate di batteri e virus, sia patogeni che non patogeni (microbioti commensali). In particolare, sia il plesso mienterico che il plesso sottomucoso dell'intestino murino e umano esprimo il recettore TLR4 (Ligando: LPS, componente di membrana dei batteri Gram-negativi)(1), il recettore TLR3 (ligando, RNA a doppio filamento prodotto durante la replicazione virale) e il recettore TLR7 (ligando, RNA a filamento singolo di origine virale)(2). In Drosophila, la proteina Toll, di cui i recettori Toll-like dei mammiferi sono omologhi, svolge durante il periodo embrionale un ruolo morfogenetico che solo alla fine della gestazione si trasforma in un ruolo immunitario. Su queste basi e considerando che poche informazioni sono disponibili circa l'espressione prenatale dei TLR nei mammiferi, l'obbiettivo specifico del presente progetto di ricerca è quello di valutare l'espressione dei recettori TLR3,4,e 7 durante lo sviluppo embrionale del SNE.
Saranno utilizzati embrioni murini a partire dallo stadio E10 poiché a tale stadio inizia la colonizzazione dell'intestino da parte delle cellule della cresta neurale che daranno origine al SNE. Gli embrioni a differenti stadi di sviluppo saranno fissati e inclusi in paraffina o congelati.
Le sezioni ottenute da tali preparati saranno processate con tecniche di immunoistochimica e di immunofluorescenze per evidenziare l'espressione dei recettori TLR4, TLR3 e TLR7 associata all' espressione di marker della cresta neurale (ret, p75) e di marker pan-neuronali (beta 3 tubulina, PGP9.5) e neuronali specifici. Sarà inoltre utilizzato il metodo della incorporazione della bromodesossiuridina per valutare lo stato proliferativo delle cellule.
1)Rumio C., Besusso D., Arnaboldi F., Palazzo M., Selleri S., Gariboldi S., Akira S., Vematsu S., Bignami P., Criani V., Menard S., Balsari A.. Activation of smooth muscle and myenteric plexus cells of jejunum via Toll-Like receptor 4. J Cell Physiol. 2006 Jul; 2008 (1): 47-54.
2)Barajon I., Arnaboldi F., Opizzi E., Ripamonti G., Palazzo M. and Serrao G. Toll-like receptors are expressed in enteric nervous system and dorsal root ganglia. 2006, Italian Journal of Anatomy and Embriology, vol.111, suppl.2. pag.13 LX Congresso Società Italiana di Anatomia e Istologia (Pavi