Livelli di GMP ciclico piastrinico e aggregazione da adrenalina nell'ipertensione arteriosa umana
ProgettoBackground: Evidenze cliniche e sperimentali documentano molteplici interazioni tra sistema nervoso simpatico e ossido nitrico nella regolazione cardiovascolare. In particolare, sulle piastrine l'adrenalina esercita un'azione aggregante, mentre l'ossido nitrico (NO) inibisce l'aggregazione attraverso il secondo messaggero GMP ciclico (GMPc).
Scopo del Lavoro: Valutare se i livelli di GMP ciclico piastrinico sono inversamente corrrelati con la risposta aggregante alla adrenalina in piastrine di ipertesi essenziali.
Protocollo: Soggetti ipertesi essenziali di grado I-II, non trattati (n=40), in posizione supina da almeno 45 minuti, saranno sottoposti a prelievo di sangue venoso periferico: una aliquota di sangue (13 ml in EDTA 5 mM, eparina 10U/ml, citrato sodico 3.8%, IBMX 0.55 mM) sarà utilizzata per la determinazione di GMPc piastrinico e l'altra aliquota (9 mlx2 in citrato sodico 3.8%) per i tests di aggregazione in vitro.
Metodi:
- GMPc piastrinico: radioimmunoassay su estratti acidi di piastrine (kit Amersham. International plc, Slough, Berks., UK, cod. RPR 525) secondo Watanabe et al. (Circulation 1993; 88:29).
- Aggregazione piastrinica: metodo turbidimetrico (aggregometro ottico a due canali, Chronolog Corp. US) su plasma ricco di piastrine (PRP)
Agente aggregante: Adrenalina (Mascia Brunelli, Italia, concentrazione finale 20, 10, 5, 2.5 µM).
Time-course: la curva dose-risposta di aggregazione alla adrenalina sarà valutata al tempo 0 e dopo 60 minuti di incubazione di PRP a temperatura ambiente.
Scopo del Lavoro: Valutare se i livelli di GMP ciclico piastrinico sono inversamente corrrelati con la risposta aggregante alla adrenalina in piastrine di ipertesi essenziali.
Protocollo: Soggetti ipertesi essenziali di grado I-II, non trattati (n=40), in posizione supina da almeno 45 minuti, saranno sottoposti a prelievo di sangue venoso periferico: una aliquota di sangue (13 ml in EDTA 5 mM, eparina 10U/ml, citrato sodico 3.8%, IBMX 0.55 mM) sarà utilizzata per la determinazione di GMPc piastrinico e l'altra aliquota (9 mlx2 in citrato sodico 3.8%) per i tests di aggregazione in vitro.
Metodi:
- GMPc piastrinico: radioimmunoassay su estratti acidi di piastrine (kit Amersham. International plc, Slough, Berks., UK, cod. RPR 525) secondo Watanabe et al. (Circulation 1993; 88:29).
- Aggregazione piastrinica: metodo turbidimetrico (aggregometro ottico a due canali, Chronolog Corp. US) su plasma ricco di piastrine (PRP)
Agente aggregante: Adrenalina (Mascia Brunelli, Italia, concentrazione finale 20, 10, 5, 2.5 µM).
Time-course: la curva dose-risposta di aggregazione alla adrenalina sarà valutata al tempo 0 e dopo 60 minuti di incubazione di PRP a temperatura ambiente.