Analisi dell'espressione dei microRNA e studio funzionale delle vie di segnale intracellulare da essi regolate nei tumori paratiroidei umani
Progetto L'iperparatiroidismo primitivo, ormai divenuto di frequente riscontro, è sostenuto da una neoplasia paratiroidea. Lo studio delle sindromi famigliari e dei modelli murini di iperparatiroidismo primitivo ha identificato oncogeni come ciclina D1 e RET, e oncosoppressori come menina e parafibromina, le cui alterazioni geniche attivano vie proliferative (chinasi del ciclo cellulare, via NF-kB) o "spengono" vie inibitorie (TGFbeta e Wnt/beta-catenina), determinando un vantaggio di crescita. Tuttavia, rimane oscura la regolazione e l¿interazione di queste vie di segnale nella cellula paratiroidea. Il signaling intracellulare è il bersaglio dell'azione dei microRNA. I geni dei microRNA codificano un singolo filamento di RNA di circa 21-23 nucleotidi, la cui funzione consiste nel regolare l'espressione dei geni target. In molte neoplasie umane, il profilo di espressione dei microRNA risulta significativamente associato alla classificazione, diagnosi, stadiazione, progressione e prognosi del tumore. Fino ad ora non sono disponibili dati sui profili di espressione dei microRNA nei tumori paratiroidei né la loro interazione con le vie di signalling intracellulare della cellula paratiroidea.
Lo studio si propone pertanto di definire il pattern di espressione dei microRNA nei diversi tumori paratiroidei al fine di :
1)identificare le vie di signalling alterate nella tumorigenesi paratiroidea
2)ricercare potenziali marcatori molecolari associati al comportamento biologico, alla progressione e alla risposta al trattamento
3)identificare nuovi bersagli molecolari per una terapia mirata
Lo studio prevede:
1)raccolta, previo consenso informato, di circa 50 tessuti paratiroidei tumorali (adenomi, iperplasie e carcinomi) provenienti da pazienti affetti da iperparatiroidismo primitivo sporadico o famigliare trattati chirurgicamente, associata alla raccolta di campioni di sangue periferico per l'analisi del DNA genomico e dei relativi dati clinici, biochimici e di imaging
2)caratterizzazione dei tessuti mediante ricerca delle mutazioni dei geni RET, MEN1, HRPT2 nel DNA somatico/genomico e analisi dell¿espressione di ciclina D1, menina e parafibromina mediante immunoistochimica
3)analisi dell¿espressione dei microRNA mediante microarray (Applera Biosystem) su RNA totale estratto dai tessuti
4)confronto dei patterns di espressione dei microRNA ottenuti nei diversi tumori paratiroidei tra loro e con il tessuto paratiroideo normale
5)correlazione dei patterns di espressione dei microRNA ottenuti con le caratteristiche cliniche, istologiche, genetiche dei tessuti analizzati
6)identificazione delle vie di segnale regolate dai microRNA la cui espressione varia significativamente nei diversi tumori paratiroidei
7)studio funzionale delle vie di segnale intracellulare mediante silencing dei microRNA target in cellule HEK293 transfettate con il recettore sensore del calcio (modello di cellula paratiroidea) e in cellule provenienti da colture primarie di tumori paratiroidei.