Espressione del cotrasportatore Na+/glucosio (SGLT1) nel mesotelio viscerale e parietale della pleura di pecora
Progetto Il liquido pleurico è rimosso da vari meccanismi: 1) assorbimento in base alle forze di Starling nei capillari della pleura viscerale, che nelle specie a pleura sottile (coniglio, gatto, cane) appartengono al circolo polmonare (Agostoni, Physiol. Rev., 1972); 2) drenaggio linfatico attraverso gli stomi della pleura parietale (Miniati e coll., Am. J. Physiol., 1988); 3) assorbimento al seguito di un trasporto attivo di soluti da parte del mesotelio (Agostoni e Zocchi; Zocchi e coll., Resp. Physiol., 1993; 1996); 4) transcitosi (Bodega e coll., Am. J. Physiol., 2002). Il meccanismo 3 è stato messo in evidenza confrontando nel coniglio la velocità di rimozione di idrotoraci con o senza inibitori specifici di trasporti attivi. L¿assorbimento di soluti sembra effettuato da un doppio scambiatore Na+/H+,Cl-/HCO3- e da un cotrasportatore Na+/glucosio sul lato luminale del mesotelio, e da una pompa Na+/K+ sul lato interstiziale. Recenti saggi di ¿Western blot¿ sulle proteine estratte dal mesotelio pleurico di coniglio hanno dimostrato che il cotrasportatore Na+/glucosio (SGLT1) è espresso sia nel mesotelio viscerale che in quello parietale.
Nelle specie a pleura viscerale spessa (pecora, maiale e, in misura minore, uomo) l¿assorbimento di liquido da parte dei capillari è stato negato per 2 motivi (Lai-Fook, Physiol. Rev., 2004). Primo, in queste specie la pleura viscerale è irrorata dal circolo bronchiale (sistemico), e quindi le forze di Starling di questi capillari dovrebbero filtrare, non assorbire liquido. D¿altra parte, dato che anche questi capillari sono drenati dalle vene polmonari, è probabile che la loro pressione sia simile a quella dei capillari polmonari (Agostoni, Physiol. Rev., 1972). Il secondo motivo è la relativamente grande distanza dei capillari della pleura viscerale dal mesotelio (40-50 micrometri nelle zone dorso-caudali della pecora). D¿altra parte, questo ostacolo potrebbe essere superato se anche in queste specie vi fosse un assorbimento di liquido al seguito di un trasporto attivo di soluti da parte del mesotelio. Pertanto, lo scopo di questa ricerca è quello di stabilire se anche nel mesotelio viscerale e parietale di pecora è espresso il cotrasportatore Na+/glucosio.
L¿identificazione molecolare del cotrasportatore Na+/glucosio (SGLT1) sarà condotta con saggi di ¿Western Blot¿. Il mesotelio verrà prelevato per raschiamento dalla pleura viscerale o parietale di agnelli anestetizzati. Dal materiale raccolto verranno estratte e dosate le proteine totali. Queste saranno denaturate, separate con elettroforesi e, quindi, trasferite per "elettroblotting" su una membrana di polivinilidene difluoruro. Le proteine saranno incubate con l¿anticorpo primario e poi con un anticorpo secondario, coniugato con perossidasi, per rivelare l¿anticorpo primario legato. La specificità del segnale sarà dimostrata svolgendo in parallelo saggi nei quali l¿anticorpo primario verrà preventivamente preadsorbito dal corrispondente antigene.