Presupposti
La Mb è un'emoproteina presente nel miocardio e nel muscolo scheletrico umano il cui centro funzionale è costituito da un anello porfirinico contenente un atomo di ferro (Fe), l'eme.
Recenti studi hanno dimostrato la possibilità dell¿eme di legare, tra i vari ligandi di interesse funzionale (O2, CO), anche l¿NO, suggerendo in tal modo l¿ipotesi che la Mb svolga un ruolo attivo nel mantenimento dell'omeostasi dell'NO, limitando così l'inattivazione della COX. Pertanto, il ruolo principale svolto dalla Mb, da riserva e trasportatore di O2, diviene piuttosto quello di regolatore dell'omeostasi dell'NO.
Inoltre, Mb umana è caratterizzata dalla presenza della Cys 110, un aminoacido mai
riscontrato in Mb di altri mammiferi. Tale gruppo cisteinico, posizionato in un sito accessibile della molecola di Mb, reagendo con NO, dà luogo alla Mb nitrosilata, contribuendo in modo significativo al ruolo della Mb di scavenger dell¿NO.
Obiettivo la presente ricerca si propone di studiare la reazione di nitrosilazione della mioglobina con spettroscopia a risonanza magnetica nucleare (MRS), partendo da molecole modello, quali il glutatione, a sua volta molecola fondamentale costituente della difesa antiossidante dell¿organismo, e/o la stessa cisteina. Il confronto con spettri ottenuti su Mioglobina di cavallo, priva del residuo cisteinico, permetterà di far ulteriore luce sul ruolo peculiare della cisteina della Mb umana,nonchè delle sue diverse isoforme, nell¿interazione con NO.
Descrizione Spettri mono e bidimensionali 1H-15N NMR verranno acquisiti su soluzioni (0.4 mM, 2H2O/H2O (1:9, v/v) in tampone fosfato a pH=7.0) di glutatione, cisteina e Mb incubate in NaNO2, marcato in 15N, su uno spettrometro ad alta risoluzione (400 MHz Bruker Avance). La presenza del legame cisteinico verrà valutata sia negli spettri 1D 15N, sia negli spettri 2D attraverso la costante di accoppiamento long-range.
La Mb è un'emoproteina presente nel miocardio e nel muscolo scheletrico umano il cui centro funzionale è costituito da un anello porfirinico contenente un atomo di ferro (Fe), l'eme.
Recenti studi hanno dimostrato la possibilità dell¿eme di legare, tra i vari ligandi di interesse funzionale (O2, CO), anche l¿NO, suggerendo in tal modo l¿ipotesi che la Mb svolga un ruolo attivo nel mantenimento dell'omeostasi dell'NO, limitando così l'inattivazione della COX. Pertanto, il ruolo principale svolto dalla Mb, da riserva e trasportatore di O2, diviene piuttosto quello di regolatore dell'omeostasi dell'NO.
Inoltre, Mb umana è caratterizzata dalla presenza della Cys 110, un aminoacido mai
riscontrato in Mb di altri mammiferi. Tale gruppo cisteinico, posizionato in un sito accessibile della molecola di Mb, reagendo con NO, dà luogo alla Mb nitrosilata, contribuendo in modo significativo al ruolo della Mb di scavenger dell¿NO.
Obiettivo la presente ricerca si propone di studiare la reazione di nitrosilazione della mioglobina con spettroscopia a risonanza magnetica nucleare (MRS), partendo da molecole modello, quali il glutatione, a sua volta molecola fondamentale costituente della difesa antiossidante dell¿organismo, e/o la stessa cisteina. Il confronto con spettri ottenuti su Mioglobina di cavallo, priva del residuo cisteinico, permetterà di far ulteriore luce sul ruolo peculiare della cisteina della Mb umana,nonchè delle sue diverse isoforme, nell¿interazione con NO.
Descrizione Spettri mono e bidimensionali 1H-15N NMR verranno acquisiti su soluzioni (0.4 mM, 2H2O/H2O (1:9, v/v) in tampone fosfato a pH=7.0) di glutatione, cisteina e Mb incubate in NaNO2, marcato in 15N, su uno spettrometro ad alta risoluzione (400 MHz Bruker Avance). La presenza del legame cisteinico verrà valutata sia negli spettri 1D 15N, sia negli spettri 2D attraverso la costante di accoppiamento long-range.