La regolazione del profilo trascrizionale espresso da cellule della risposta immunitaria è un elemento fondamentale per lo sviluppo di una risposta infiammatoria, e l'avvento di approcci high-throughput per analisi del profilo trascrizionale ha prodotto nel corso dell'ultimo decennio una enorme mole di informazioni in merito a questo processo. Complessivamente presi questi studi hanno messo in evidenza il ruolo centrale in questo processo di alcuni fattori trascrizionale per i quali la ricerca di molecole farmacologicamente attive in grado di modularne l¿attività rappresenta una delle più promettenti frontiere nel settore del controllo del processo infiammatorio. Il proponente è da anni attivo in questa area di indagine, avendo in particolare contribuito alla caratterizzazione del profilo trascrizionale associato al processo di differenziazione e attivazione di fagociti mononucleati (4-7).
I microRNA sono corte sequenze di RNA ottenute per processazione sequenziale (pri-mRNA - pre-miRNA ¿miRNA maturo) da trascritti non codificanti espressi in modo strettamente tessuto-ristretto e in definiti stati funzionali cellulari. Caratterizzati in particolare in area oncologica, ove hanno dimostrato di svolgere un ruolo importante nella regolazione del profilo trascrizionale associato allo stadio differenziativo e di attivazione di una cellula, questi piccoli ¿RNA interferenti endogeni¿ regolano il profilo genico espresso mediante l¿interferenza con il processo di traduzione e in alcuni casi la degradazione di mRNA target. Per valutare il possibile ruolo di questo meccanismo nel controllo della risposta infiammatoria, il proponente ha rianalizzato un dataset precedentemente generato in piattaforma Affymetrix relativo al profilo trascrizionale associato all¿attivazione macrofagica da lipopolisaccaride dopo avere identificato alcune sequenze espresse non annotate quali putativi pri-miRNA in virtù della localizzazione cromosomica (6). I risultati preliminari hanno evidenziato come l¿attivazione fagocitica si associ all¿induzione di un numero ristretto di putativi miRNA, e la comparazione dei dati relativi a geni regolati negativamente durante il processo di attivazione fagocitica con i target predetti dei miRNA identificati (ottenuti dal sito ) ha portato alla identificazione nel set di trascritti negativamente regolati di un significativo numero di potenziali target dei miRNA identificati. Complessivamente, tali risultati preliminari indicano che alcuni miRNA potrebbero essere coinvolti nella regolazione del profilo trascrizionale associato all¿attivazione fagocitica, e potrebbero rappresentare un target originale per la modulazione della risposta infiammatoria. Il proponente intende verificare mediante Q-PCR l¿effettiva induzione di questi miRNA, e intende verificarne l¿effettivo ruolo nel controllo di potenziali trascritti target mediante clonaggio dei 3¿-UTR di tali geni e loro valutazione in assay di luciferasi.