RasGRF1 è un fattore di scambio di nucleotidi delle piccole GTPasi Ras e Rac, specificamente espresso nei neuroni del sistema nervoso centrale e rappresenta un punto di integrazione per i diversi segnali che sono trasmessi a valle da queste GTPasi. Queste vie svolgono un ruolo cruciale in processi neurologici fondamentali, quali l¿apprendimento e la formazione della memoria, nonché nelle conseguenze comportamentali all¿esposizione cronica a droghe.
Dati preliminari ottenuti utilizzando come esca un frammento della porzione N-terminale di RasGRF1 in saggi di "pull down", e identificazione delle proteine partners mediante analisi per spettrometria di massa dei digeriti triptici di bande proteiche isolate o dell'intera miscela di proteine legate ha permesso di individuare due classi di proteine associate a RasGRF1: proteine ribosomali e proteine coivolte nel metabolismo dell'RNA. Inoltre è stato possibile dimostrare che tale interazione è mediata da RNA . Questi dati preliminari suggeriscono un possibile nuovo ruolo per RasGRF1 e la signaling attivata da questa molecola. Intendiamo quindi indagare se l¿RNA lega in maniera specifica la regione N-terminale di RasGRF1 e se tale interazione avviene anche quando l'intera molecola di RasGRF1 viene utilizzata come esca. Si indagherà inoltre mediante analisi di microarray se esista una interazione specifica con classi particolari di RNA. E' nostra intenzione anche capire se sequenze specifiche sono coinvolti in tale interazione. Per questo ultimo aspetto è possibile utilizzare la tecnologia di CLIP (cross-linking Immunoprecipitation) che sfrutta le radiazioni ultraviolette per legare covalentemente RNA a proteine e anticorpi specifici per immunoprecipitare RasGRF1 con possibili RNA covalentemente associati, da isolare e identificare mediante amplificazione, clonaggio e sequenziamento. Al fine di individuare un possibile ruolo funzionale di tale interazione è anche nostra intenzione indagare se RasGRF1 è associato alla macchina traduzionale separando mediante centrifugazione in gradiente di saccarosio le frazioni dei polisomi da quelle di ribosomi isolati. L¿analisi del profilo di RNA e di western blotting con anticorpi specifici per RasGRF1 delle varie frazioni isolate anche a seguito di specifiche stimolazioni, ci permetterà di definire se RasGRF1 è associato alla macchina traduzionale attiva.L¿ottenimento di tutte queste informazioni ci permetterà di definire un ruolo specifico e funzionale dell¿interazione di RasGRF1 con le proteine ribosomali e con proteine coinvolte nel metabolismo dell¿RNA. Inoltre questi dati potranno complessivamente darci indicazioni su un possibile coinvolgimento di RasGRF1 nella sintesi proteica, un aspetto estremamente interessante sopratutto riguardo al ruolo della sintesi proteica localizzata ai dentriti nella plasticità sinaptica.