Valutazione dell'espressione di geni del ciclo cellulare e dell'apoptosi nel mesotelioma maligno (MM) mediante metodica tissue microarrays (TMA).
Progetto INTRODUZIONE:Il mesotelioma maligno(MM)è aggressivo e resistente alle attuali terapie.Le basi molecolari di ciò, ampiamente ignote,potrebbero risiedere in difetti dell'apoptosi e del ciclo cellulare. Alterazioni di geni apoptotici come Bax, Survivin,Bcl-2 e di geni a valle di p53, peculiarmente non mutata nel MM, sono stati già documentati,anche dal nostro gruppo. Con finanziamenti MIUR 2004 sono state rilevate con metodica microfluidic cards alterazioni anche di altri geni oltre a quelli documentati in letteratura,con importanti implicazioni per lo sviluppo di nuove terapie oncologiche molecolari altamente specifiche.La tecnologia dei tissue microarrays(TMA)consente elevata processività con i seguenti vantaggi:studio simultaneo di numerosi casi per singola sezione istologica, riproducibiltà sperimentale, rapidità di interpretazione e comparabilità dei risultati ottenuti con diversi anticorpi in sezioni consecutive.Scopo di questo studio è la valutazione immunoistochimica mediante TMA del prodotto proteico di geni implicati nell'apoptosi e nel ciclo cellulare già da noi indagati con microfluidic cards nei MM,non esistendo a oggi dati in letteratura in merito.MATERIALI E METODI:casistica:150 MM d'archivio fissati in formalina ed inclusi in paraffina,con noti parametri clinicopatologici; metodi:immunoistochimica:metodica ABC standard con immunocoloratore automatico BioGenex, anticorpi:CHK1,DIABLO,CSE1L, TRIP,TNSF4,TNFRS9,TNFSF11,BAX,CASP8,CASP3, BCL2L,SURVIVIN,ABL1,CYCLB1,CCNH,CDC6,UBE1L, CDC2,CYCLD2,P18,SKP2,sistema di rivelazione Envision/HMP,cromogeno:DAB; valutazione dei risultati mediante analisi dell'intensità e della percentuale di cellule neoplastiche immunoreattive;analisi statistica:test di Fisher,chi-square test.OBIETTIVI SPECIFICI:selezione di MM d'archivio,identificazione delle aree da prelevare per l'assemblaggio del TMA;valutazione dell'espressione proteica dei geni selezionati;analisi statistica dei risultati.