Il signaling ceramide-mediato è un meccanismo ubiquitario coinvolto nella regolazione di fondamentali processi cellulari quali proliferazione, differenziamento e apoptosi. In cellule gliali, come in altri tipi cellulari, il controllo dei livelli di ceramide (Cer) coinvolge sia l¿attivazione di specifici enzimi a differente localizzazione subcellulare, sia la regolazione dei movimenti intracellulari di tale molecola. La natura idrofobica del Cer, che ne impedisce la diffusione spontanea nel citoplasma limitandone le possibili interazioni con bersagli responsabili delle risposte da esso evocate, costituisce un elemento cruciale nello studio del signaling Cer-mediato e sottolinea il possibile ruolo di variazioni sede-specifiche del Cer in tale processo. Studi condotti nei nostri laboratori hanno indicato il ruolo di CERT nel trasporto del Cer in cellule gliali. CERT è una proteina citosolica recante un dominio START che riconosce in modo specifico il Cer, un motivo FFAT e un dominio PH che agiscono come determinanti di attacco rispettivamente al reticolo endoplasmatico e al Golgi. In particolare il dominio START è caratteristico di diverse proteine implicate in meccanismi di signaling che coinvolgono molecole di natura lipidica. Questo progetto si propone di valutare il ruolo di CERT nei processi coinvolti nel controllo di proliferazione e apoptosi in cellule gliali. In linee cellulari da glioma umano, verrà valutato il contributo di CERT alla regolazione dei livelli e della compartimentazione di Cer in risposta a stimoli quali fattori di crescita, chemioterapici, citochine. A tale scopo verranno utilizzati modelli cellulari caratterizzati da differenti livelli di CERT, ottenuti anche mediante overespressione e silenziamento della proteina. Inoltre ci si propone di studiare il ruolo di CERT nell¿interazione del Cer con specifiche proteine di signaling coinvolte nel controllo di proliferazione e apoptosi, utilizzando, tra l'altro, CERT o suoi mutanti di delezione per specifici domini funzionali. Questo studio permetterà di chiarire i meccanismi coinvolti nell'interazione del Cer con specifici bersagli intracellulari responsabili della risposta biologica a tale mediatore, contribuendo alla comprensione di un aspetto cruciale e ancora irrisolto dei meccanismi di signaling Cer-mediato.