IDENTIFICAZIONE DELLA MUTAZIONE GENETICA DELL¿EPIDERMIOLISI BOLLOSA DEL CANE E MESSA A PUNTO DI UN TEST DIAGNOSTICO BASATO SULL¿ANALISI DEL DNA
Progetto L¿epidermolisi bollosa (EB) è una malattia ereditaria della cute che colpisce l¿uomo e gli animali domestici. Esistono diverse forme di questa patologia, ma il segno caratteristico sia nell¿uomo che negli animali è la formazione di vescicole spontanee dovute a traumi anche di lieve entità a livello della cute e delle mucose. Sono state classificate forme di Epidermolisi Bollosa Semplice (EB), forme di tipo Giunzionale (JEB) e Distrofico (DEB). La forma che sembra però interessare il cane è la forma cosiddetta di tipo ¿giunzionale¿ (JEB). L¿epidermolisi bollosa è una malattia ereditaria a carattere autosomico recessivo. I soggetti malati muoiono spesso durante le prime settimane di vita. Il Kurzhaar è sicuramente la razza più colpita nella forma di JEB. Nel cane lo studio del DNA ha rilevato una mutazione che riduce la produzione di ¿laminina 5¿ causando un¿anomalia a livello dell¿adesione cellulare dell¿epitelio cutaneo. La presente proposta di ricerca ha come obbiettivo la messa a punto di un efficace test diagnostico per l¿identificazione di soggetti portatori. Si prevede infatti l¿allestimento di un protocollo di PCR per l¿amplificazione specifica dell¿allele wilde type e dell¿allele mutato (Gene LAMA3). La mutazione è costituita da un¿inserzione di 6500 bp all¿interno dell¿introne 35 che causa l¿attivazione di siti di ¿splicing¿ criptici determinando la presenza di un inserto di 227 bp nel cDNA e successiva alterazione della traduzione della laminina. Il disegno sperimentale prevede l¿allestimento di ¿primer¿ specifici che permettano di amplificare l¿allele sano e l¿allele malato. Il nuovo test diagnostico verrà testato su 40 kurzhaar. Il valore aggiunto rispetto al passato sarebbe quindi rappresentato, mediante l¿analisi del DNA, dalla possibilità di riconoscere i soggetti portatori, sani, e malati in età precoce con l¿attuazione di programmi selettivi per la completa eradicazione della malattia nelle principali razze canine interessate da questa patologia.