CARATTERIZZAZIONE E PRODUZIONE DI ANTICORPI MONOCLONALI RIVOLTI CONTRO ANTIGENI DI CELLULE DENDRITICHE UMANE
Progetto Le cellule dendritiche (DC) sono cellule presentanti l¿antigene che svolgono un ruolo centrale nell'avviare, amplificare e polarizzare la risposta immune. Esse sono attivate a rispondere verso gli insulti esterni ed interni attraverso il riconoscimento di specifiche categorie di molecole, associate ai patogeni invasori o espresse dalle cellule autologhe alterate. A loro volta, le DC attivano, modulano e polarizzano le risposte immuni specifiche attraverso l¿espressione di molecole costimolatorie e la produzione di citochine regolatorie, capaci di promuovere risposte T-helper 1, T-helper 2 o T-regolatorie.
Lo studio dell¿immunobiologia delle DC, fondamentale per la comprensione dei processi immunopatologici, e la caratterizzazione di DC utilizzabili per protocolli di immunoterapia cellulare, richiedono la disponibilità ¿ attualmente insoddisfacente - di anticorpi (Ab) rivolti verso le numerosissime molecole implicate nella funzione delle DC. In questo studio ci proponiamo pertanto di produrre, selezionare e caratterizzare Ab monoclonali murini rivolti contro antigeni di DC umane.
Lo svolgimento della ricerca prevede le seguenti tappe operative:
- differenziamento in vitro di DC umane a partire da monociti;
- immunizzazione di topi mediante somministrazione di lisati cellulari di tali DC;
- produzione di ibridomi mediante fusione degli splenociti ottenuti dai topi immunizzati con cellule di mieloma;
- selezione e coltura degli ibridomi secernenti Ab rivolti contro antigeni di DC umane, mediante tecniche di cell-ELISA, citofluorimetria, microscopia a fluorescenza;
- caratterizzazione degli Ab di interesse, con identificazione dell¿antigene riconosciuto mediante tecniche di microscopia confocale, frazionamento subcellulare, western blotting, immunoprecipitazione, ed altre tecniche che si rendessero necessarie.
Obiettivo finale della ricerca sarà ottenere nuovi Ab monoclonali utilizzabili per lo studio dell¿immunobiologia delle DC.