MICROENVIRONMENT FACTORS PROMOTING THE QUALITY OF IMMATURE VITRIFIED OOCYTES IN THE DOMESTIC CAT MODEL

Gli oociti immaturi vitrificati (VOs) di gatto domestico sono un modello utile per sviluppare protocolli di crioconservazione dei gameti per la salvaguardia della fertilità e della biodiversità nei felini selvatici a rischio estinzione. Sebbene la vitrificazione di oociti immaturi sia conveniente per i suoi vantaggi pratici (disponibilità di gameti, velocità e possibilità di esecuzione in campo della tecnica), i VOs spesso degenerano dopo il warming (i.e. il ripristino della temperatura fisiologica dopo vitrificazione), e i loro tassi di maturazione e sviluppo embrionale in vitro sono scarsi se comparati a quelli degli oociti freschi. Pertanto, sono necessari miglioramenti per sfruttare appieno il loro potenziale, come degli arricchimenti fisico-chimici al protocollo di vitrificazione o alle condizioni di coltura post-warming. In questo progetto, la vitrificazione di oociti immaturi con il metodo Cryotop ha prodotto tassi di vitalità elevati (90,8%), ripetibili e riproducibili. Per migliorare la maturazione dei VOs e il loro sviluppo, sono state poi impiegate due strategie. La prima ha previsto la creazione di strutture tridimensionali simil-follicolari (i.e. cellule della granulosa coltivate in microcapsule di alginato), utilizzate come condizione di coltura arricchita per la maturazione in vitro dei VOs, e ha portato al mantenimento dell'attività steroidogenica delle cellule della granulosa e alla ripresa della meiosi dei VOs co-coltivati (11,8% di maturazione). La seconda strategia invece, dopo la valutazione dell'attivazione apoptotica nei VOs, ha previsto l'aggiunta di un inibitore chimico delle caspasi che ha prodotto tassi di maturazione (53,1%) simili a quelli degli oociti freschi di controllo e buoni tassi di sviluppo embrionale (34,4%). Lo sviluppo embrionale a stadi avanzati è rimasto scarso, e sono necessarie ulteriori ricerche per ottimizzare la competenza di sviluppo dei VOs. Indagini molecolari sui danni indotti dalla crioconservazione e sulle peculiarità degli embrioni derivati da oociti crioconservati potrebbero migliorare i risultati dei VOs in vitro, e quindi favorire la creazione di biobanche per i gameti felini.