Espressione di mirna in monociti bovini dopo stimolazione in vitro con challengers infiammatori

I microRNA (miRNA) sono piccoli RNA non codificanti, che regolano l’espressione genica posttrascrizionale tramite interazione sequenza specifica con l’estremità 3’-UTR dell’mRNA bersaglio inibendo e/o bloccando la traduzione. Un singolo miRNA può regolare molti mRNA, e diversi miRNA possono regolare un solo bersaglio. Lo scopo di questo lavoro è quello di individuare alcuni miRNA espressi in monociti bovini CD14+ purificati da sangue intero attraverso l’utilizzo della tecnologia MACS (Miltenyi), in condizioni fisiologiche e dopo stimolazione con LPS (Gram -) e SEB (Gram+). Basandosi su precedenti studi in medicina umana, sono stati selezionati i miR-16 come controllo e i miR-125b, miR-155 (coinvolto nella risposta infiammatoria) miR-146a (regolatore negativo dell’immunità) e miR-223 come target. L’RNA totale è stato estratto mediante kit mirVana™ (Ambion), retrotrascritto con primer stem-loop specifici per ciascun miRNA e amplificato mediante PCR Real-Time con i corrispondenti MicroRNA TaqMan® Assay kit. I primer e le sonde TaqMan utilizzate, disegnate per l’uomo, sono state validate per il bovino. Ciascun target è stato quantificato mediante calcolo del ddCt verso il gene di controllo endogeno miR-16. I risultati ottenuti hanno confermato la presenza dei miRNA considerati nei monociti CD14+ e che tali miRNA sono differenzialmente espressi tra monociti controllo e stimolati. In particolare, miR-155 è sovraespresso in seguito a stimolazione con LPS, mentre con SEB i risultati hanno rivelato una down-regolazione del miR-125b e del miR-155.