Un approccio di elettroforesi bi-dimensionale per lo studio dell¿espressione differenziale di conglutina gamma in semi in sviluppo, maturi e germinanti di lupino.
Progetto Lo studio dei proteomi di sistemi vegetali, e tra questi quelli dei tessuti cotiledonari dei semi delle leguminose, riveste un notevole interesse di base ed applicativo. Nel corso di un precedente progetto abbiamo iniziato l¿analisi del proteoma di lupino, un seme di leguminosa di crescente interesse per le proprietà biologiche e nutraceutiche di alcune delle sue proteine, in particolare la conglutina gamma (1,2). Questa proteina etero-dimerica non ha funzione biologica nota e rappresenta il prodotto di almeno due geni che risultano diversamente espressi durante l¿ontogenesi del seme. Inoltre piccole, ma significative e localizzate differenze di sequenza sembrano giocare un ruolo chiave nella maturazione proteolitica dei due prodotti genici e probabilmente anche nella destinazione della proteina. Queste caratteristiche rendono difficoltose l¿identificazione e l¿isolamento, con approcci biochimici tradizionali, delle due forme di conglutina gamma diversamente espresse e ¿processate¿.
Scopo di questo progetto è quello di utilizzare mappe elettroforetiche bidimensionali di proteine cotiledonarie del seme di lupino dalla maturazione alla germinazione, passando attraverso lo stadio di quiescenza, per l¿identificazione di polipeptidi correlabili con la conglutina gamma. A questo scopo si effettueranno comparazioni con le mappe 2D del proteoma del seme maturo di lupino e si utilizzeranno tecniche di Western blotting con anticorpi policlonali altamente specifici, già disponibili presso il laboratorio, per l¿identificazione di pro-polipeptidi o di isoforme variamente espresse della proteina. Tali indicazioni preliminari verranno validate mediante spettrometria di massa dei frammenti triptici ottenuti da specifici ¿spots¿.
Questo progetto di ¿developmental plant proteomics¿ consentirà di raggiungere il duplice obiettivo di identificare i processi di maturazione differenziale dei due prodotti genici della conglutina gamma e di correlarne l¿evenienza con il possibile ruolo fisiologico della proteina nel seme di lupino.
Riferimenti
1. C. Magni, F. Sessa, E. Accardo, M. Vanoni, P. Morazzoni, A. Scarafoni, M. Duranti J. Nutr. Biochem. (2004), 15: 646-650.
2. C. R. Sirtori, M. R. Lovati, C. Manzoni, S. Castiglioni, M. Duranti, C. Magni, S. Morandi, A. D¿Agostina, A. Arnoldi J. Nutr. (2004) 134: 18-23.