Studio sulla attività di modulazione dell'apoptosi di monociti e polimorofonucleati bovini da parte della proteina di fase acuta alpha1-glicoproteina acida

L'alfa 1-glicoproteina acida (AGP) è una proteina di fase acuta normalmente espressa nel torrente circolatiorio la cui concentrazione aumenta (fino a tre volte nel bovino) in corso di reazione sistemica alla infiammazione. La AGP appartiene alla famiglia delle immunocaline, un gruppo di proteine di trasporto che possono esercitare anche una azione di tipo immunomodulatorio. Lo scopo del progetto è quello di valutare la attività di modulazione dell'apoptosi da parte della AGP bovina (boAGP). Il modello cellulare prevede la utilizzazione di due tipi cellulari, i granulociti neutrofili ed i monociti, che verranno purificati dal torrente circolatorio mediante frazionamento su gradiente di Percoll e magnetic sorting, rispettivamente. La capacità di modulare l'apoptosi verrà valutata sia per quello che riguarda l'apoptosi spontanea che l'apoptosi indotta mediante staurosporina. Verranno utilizzate due differenti concentrazioni di boAGP, una fisiologica (0.3 mg/ml) ed una di fase acuta (0.9 mg/ml), e l'apoptosi verrà valutata mediante un saggio enzimatico di due enzimi coinvolti nella fase terminale, la caspasi -3 e la caspasi-7. Ogni esperimento verrà condotto in triplicato, e si prevede di ripetere l'esperimento su almeno sei animali. Dal momento che l¿AGP costituisce una delle proteine più glicosilate nel sangue (>40%), è verosimile che il suo pattern oligosaccaridico sia molto importante nelle funzioni della proteina tanto più che è stato evidenziato come la glicosilazione dell'AGP sia modificata in corso di risposta sistemica della infiammazione, almeno per quello che riguarda la specie felina. Una seconda parte del progetto prevede la ripetizione di tutti gli esperimenti utilizzando una boAGP desialilata enzimaticamente mediante trattamento con neuraminidasi, un enzima in grado di idrolizzare i residui terminali di acido sialico per approfondire, almeno in via preliminare, la base biochimica di una eventuale funzione di modulazioni dell'apoptosi da parte dell'AGP.