Studio di epidemiologia molecolare sul ruolo dei geni agr, trap e LukF-LukS di Staph.aureus nella patogenesi delle mastiti bovine.

Mediante uno studio di epidemiologia molecolare, sarà valutata l¿associazione tra i polimorfismi dei geni agr, trap e LukS-LukF e le alterazioni indotte in cellule epiteliali mammarie e in PMN del bovino. I geni agr (regola RNA-III) e trap (T-RNA activating protein), presiedono all¿espressione di diversi fattori di virulenza. I geni LukS, LukF, regolano l¿espressione della tossina PVL che ha un'azione litica sui PMN e sui macrofagi e aumento l'apoptosi. Saranno selezionati almeno 60 ceppi di Staph.aureus provenienti da almeno 15 diversi allevamenti. Tali ceppi saranno caratterizzati mediante analisi del polimorfismo dei geni agr e trap, LukF, LukS utilizzando primer specifici, validati in analoghe indagini su ceppi umani. I ceppi, marcati con CFDA saranno inoltre messi a contatto con colture cellulari stabilizzate di cellule epiteliali mammarie (BME-UV19) al fine di valutarne l'internalizzazione da parte delle cellule stesse mediante analisi di immagine con software Image Pro-plus, secondo una metodologia messa a punto da questo gruppo di ricerca. L'induzione di apoptosi verrà valutata, previa esposizione delle cellule epiteliali mammarie e di PMN isolati da bovine, agli stessi ceppi per tempi variabili (2-4-6 ore) mediante citometria a flusso su cell-chip e strumento Agilent Bioanalyzer 2100. I dati genetici saranno analizzati mediante cluster analysis per classificare i ceppi in base al polimorfismo congiunto dei geni considerati. Sarà quindi valutata mediante la presenza di un'associazione tra i gruppi così ottenuti e il grado di internalizzazione dei diversi ceppi e la percentuale di cellule apoptotiche osservate sia tra le cellule epiteliali mammarie sia tra i PMN. I risultati di questa indagine permetteranno di ottenere ulteriori informazioni sugli aspetti patogenetici delle infezioni da Staph.aureus e di meglio indirizzare le ricerche in corso per identificare target ottimali per lo sviluppo di vaccini innovativi.