MICROENVIRONMENT FACTORS PROMOTING THE QUALITY OF IMMATURE VITRIFIED OOCYTES IN THE DOMESTIC CAT MODEL
Tesi di Dottorato
Data di Pubblicazione:
2021
Citazione:
MICROENVIRONMENT FACTORS PROMOTING THE QUALITY OF IMMATURE VITRIFIED OOCYTES IN THE DOMESTIC CAT MODEL / M. Colombo ; tutor: G. C. Luvoni ; coordinator: V. Grieco. Dipartimento di Scienze Veterinarie per la Salute, la Produzione Animale e la Sicurezza Alimentare, 2021 Jan 28. 33. ciclo, Anno Accademico 2020. [10.13130/colombo-martina_phd2021-01-28].
Abstract:
Gli oociti immaturi vitrificati (VOs) di gatto domestico sono un modello utile per sviluppare protocolli di crioconservazione dei gameti per la salvaguardia della fertilità e della biodiversità nei felini selvatici a rischio estinzione. Sebbene la vitrificazione di oociti immaturi sia conveniente per i suoi vantaggi pratici (disponibilità di gameti, velocità e possibilità di esecuzione in campo della tecnica), i VOs spesso degenerano dopo il warming (i.e. il ripristino della temperatura fisiologica dopo vitrificazione), e i loro tassi di maturazione e sviluppo embrionale in vitro sono scarsi se comparati a quelli degli oociti freschi. Pertanto, sono necessari miglioramenti per sfruttare appieno il loro potenziale, come degli arricchimenti fisico-chimici al protocollo di vitrificazione o alle condizioni di coltura post-warming.
In questo progetto, la vitrificazione di oociti immaturi con il metodo Cryotop ha prodotto tassi di vitalità elevati (90,8%), ripetibili e riproducibili. Per migliorare la maturazione dei VOs e il loro sviluppo, sono state poi impiegate due strategie. La prima ha previsto la creazione di strutture tridimensionali simil-follicolari (i.e. cellule della granulosa coltivate in microcapsule di alginato), utilizzate come condizione di coltura arricchita per la maturazione in vitro dei VOs, e ha portato al mantenimento dell'attività steroidogenica delle cellule della granulosa e alla ripresa della meiosi dei VOs co-coltivati (11,8% di maturazione). La seconda strategia invece, dopo la valutazione dell'attivazione apoptotica nei VOs, ha previsto l'aggiunta di un inibitore chimico delle caspasi che ha prodotto tassi di maturazione (53,1%) simili a quelli degli oociti freschi di controllo e buoni tassi di sviluppo embrionale (34,4%).
Lo sviluppo embrionale a stadi avanzati è rimasto scarso, e sono necessarie ulteriori ricerche per ottimizzare la competenza di sviluppo dei VOs. Indagini molecolari sui danni indotti dalla crioconservazione e sulle peculiarità degli embrioni derivati da oociti crioconservati potrebbero migliorare i risultati dei VOs in vitro, e quindi favorire la creazione di biobanche per i gameti felini.
Tipologia IRIS:
Tesi di dottorato
Elenco autori:
M. Colombo
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