Analisi dei profili di espressione di microRNA nella tumorigenesi e progressione del tumore della mammella.

I microRNA (miRNA) sono piccoli RNA non-codificanti di circa 20 paia di basi che controllano numerosi processi biologici tramite la regolazione della traduzione degli RNA messaggeri (codificanti) in proteine. Nonostante la loro recentissima scoperta,si è già potuto osservare che alterazioni quantitative e qualitative di miRNA sono associate ad importanti meccanismi patologici, fra cui la trasformazione e progressione neoplastica. In particolare, alterazioni di miRNA sono state descritte nei processi di diffusione e metastatizzazione dei tumori, incluso il carcinoma mammario. Inoltre la tumorigenesi è strettamente legata alla formazione di vasi del sangue, processo noto come neo-angiogenesi. Il blocco dell'angiogenesi con specifici farmaci è un promettente approccio alla terapia di numerosi tumori. Il potenziale ruolo svolto dai microRNA nei processi di formazione e regolazione dell'angionesi tumorale non è attualmente noto. Il nostro progetto di ricerca ha come obiettivo specifico di indagare il profilo di espressione di un pannello di circa 100 miRNA nella progressione patologica del carcinoma mammario: iperplasia mammaria, carcinoma in-situ, carcinoma invasivo, sia nelle forme limitate al parenchima mammario, sia nelle forme con metastasi linfonodali. Il progetto verrà svolto su una casistica d'archivio ricca di centinaia di casi di pazienti affetti da carcinoma mammario con dettagliate informazioni patologiche e cliniche. La determinazione del pattern di espressione di tali miRNA verrà identificata separatamente nella componente epiteliale e vascolare di tutti i campioni. L'isolamento della popolazione cellulare di interesse avverrà tramite microdissezione laser. Di ogni campione verrà quindi isolata la popolazione cellulare epiteliale dopo colorazione con ematossilina e la componente vascolare dopo colorazione immunoistochimica con l'anticorpo anti-CD34, specifico per i vasi. Successivamente l'RNA totale verrà isolato e purificato mediante kit idonei al materiale d'archivio. La tecnologia d'analisi di questi RNA non codificanti si basa su specifiche reazioni di retrotrascrizione per ogni microRNA indagato, seguite da quantificazione relativa mediante Real-Time RT-PCR con tecnologia TaqMan. I risultati ottenuti verrano inoltre messi in relazione al profilo ottenuto da ghiandole mammarie normali. Successivamente i profili di espressione dei microRNA verranno correlati a parametri clinico-patologici, fra cui la densità vascolare, ed alla sopravvivenza dei pazienti allo scopo di valutare il ruolo dei miRNA nella angiogenesi tumorale.