Il controllo dello stato redox costituisce un importante adattamento fisiologico implicato nel mantenimento e nel ripristino dell'omeostasi cellulare.
Le specie reattive dell'ossigeno (ROS) che si formano nelle diverse tappe del metabolismo ossidativo cellulare, agiscono da secondi messaggeri e intervengono nella modulazione della proliferazione e della cascata apoptotica.
I risultati finora ottenuti indicano che melatonina (MLT) e acido alfa-lipoico (ALA), antiossidanti endogeni implicati nei
sistemi di difesa antiossidanti, agiscono in modo selettivo e dose-dipendente nelle cellule tumorali caratterizzate da elevato stress ossidativo, inibendo la proliferazione, alterando l'espressione di alcuni fattori coinvolti nella cascata apoptotica (Bcl-2 e p53), bloccando il ciclo cellulare in G1 e determinando a dosi farmacologiche apoptosi e necrosi. Nelle cellule normali gli effetti citati sono stati riscontrati solo a concentrazioni molto elevate di MLT e ALA e dopo tempi prolungati di esposizione.
Scopo del presente progetto è studiare, in linee cellulari umane normali, l'azione di MLT e ALA nei confronti dello stress ossidativo indotto. Per indurre stress ossidativo verranno utilizzati agenti chimici (H2O2), fisici (UV) e farmaci (ciclosporina A e chemioterapici) messi a contatto con la linea cellulare selezionata, secondo modelli sperimentali consolidati.
Lo studio verrà condotto su fibroblasti umani in coltura. Verranno testati gli effetti protettivi e curativi di MLT e ALA a concentrationi fisiologiche e farmacologiche messe a contatto con le cellule prima, contemporaneamente o dopo l'induzione dello stress ossidativo. Verranno valutati i seguenti parametri: proliferazione, ciclo cellulare, effettori di apoptosi, fattori implicati nelle difese antiossidanti endogene (GSH/GSSG). La proliferazione verrà valutata con test MTT, l'analisi del ciclo cellulare verrà effettuata in citofluorimetria, i fattori di segnale e della cascata apoptotica verranno analizzati con Western Blot/elettroforesi, densitometria a scansione ed Elisa, il rapporto GSH/GSSG verrà valutato in spettrometria di massa. Verrà inoltre verificato se l'azione di MLT sia mediata dai sottotipi recettoriali di membrana utilizzando anticorpi policlonali purificati.