Costruzione di un vaccino terapeutico per l'eradicazione di tumori indotti da papillomavirus umani.

Presupposti della ricerca Il programma di ricerca riguarda la costruzione di vettori ricombinanti basati sul background genetico di virus avipox (fowlpox). Tali virus, la cui replicazione è naturalmente ristretta alle cellule di uccello, sono tuttavia in grado di esprimere correttamente ed in modo costitutivo geni eterologhi in cellule di mammifero per un periodo sufficientemente lungo (circa 18-20 giorni), tale da evocare una risposta immune completa e potenzialmente protettiva. Benché il sistema d'espressione rappresentato dagli avipoxvirus sia applicabile a qualsiasi patologia infettiva della quale siano conosciuti i prodotti genici del patogeno, nel nostro progetto ci limiteremo alla costruzione di vettori fowlpox esprimenti gli oncogeni E6 ed E7 di HPV-16 geneticamente modificati in modo da impedirne l¿effetto trasformante ma mantenendone l'efficacia immunizzante, potenzialmente antitumorale. Descrizione della Ricerca La messa in commercio di due vaccini ricombinanti anti-HPV (Gardasil e Cervarix), efficaci al 95-100% contro i due genotipi altamente oncogeni HPV16 e HPV18, pur rappresentando vaccini profilattici efficaci contro l'infezione in soggetti naive, non sono tuttavia utili in soggetti già infetti. Essi evocano infatti una risposta immune neutralizzante solo contro le proteine strutturali L1/L2, che non vengono più espresse dopo l'infezione dei cheratinociti basali ed in cellule precancerose. Per questa ragione ed allo scopo di mettere a punto un vaccino terapeutico da testare nel modello animale rappresentato dal Cottontail Rabbit Papilloma Virus (CRPV) del coniglio, intendiamo costruire vettori avipox ricombinanti esprimenti le oncoproteine E6/E7 di HPV16, geneticamente modificate per inattivare la loro capacità di legare i due substrati cellulari p53 e p105Rb. Tali geni verranno infatti mutagenizzati per sostituzione dei tre aminoacidi D, C, E con tre Glicine della sequenza compresa tra gli aminoacidi 20 e 38 di E7 (E7GGG) e 32 e 65 di E6 in modo da mantenerne l'immunogenicità ma non l'attività immortalizzante/tumorigenica. Articolazione della ricerca Costruzione di virus Fowlpox ricombinanti esprimenti E6 ed E7 di HPV16, verifica dell'espressione dei transgeni, immunizzazione di conigli con i ricombinanti e valutazione della risposta umorale e cellulare. Obiettivi finali che si intendono perseguire Lo scopo finale che ci proponiamo di ottenere è la costruzione e la verifica dell'attività immunizzante e, successivamente, terapeutica di vaccini ricombinanti anti-HPV.