Ruolo dell'asse interleuchina-7 (IL-7)/IL-7R su sangue periferico e midollo osseo in pazienti HIV+ con severa linfopenia CD4.

L'infezione da HIV si caratterizza per il profondo sovvertimento dell'omeostasi T-linfocitaria, con la graduale deplezione dei linfociti CD4, solo parzialmente revertito dalla terapia antiretrovirale ad alta efficacia (HAART), come dimostrato dal fatto che fino al 30% dei pazienti trattati con HAART mantengono conte CD4 <200 a fronte del completo controllo della HIV-viremia. Dunque, la patogenesi della linfopenia CD4 appare la risultante di complesse interazioni virus/sistema immune, tanto nel sangue periferico che negli organi linfoidi, in considerazione del loro fisiologico ruolo nel mantenimento dell'omeostasi T-linfocitaria, dell'elevato numero di cellule target per HIV, e degli alti livelli di replicazione/integrazione virale. Tra questi, il midollo osseo sembrerebbe svolgere un ruolo centrale, in quanto sito di produzione dei precursori linfo- ed ematopoietici, e di citochine regolatorie, prima fra tutte IL-7, fondamentale nella stimolazione della produzione, sopravvivenza e proliferazione del comparto T-linfocitario. Sebbene in corso di HIV/AIDS sia documentata una correlazione inversa tra IL-7 plasmatica e linfopenia CD4, facendo ipotizzare un feedback compensatorio, resta ancora da chiarire se le modificazioni plasmatiche di IL-7 rispecchino modulazioni della sintesi o invece dell'espressione periferica del suo recettore (IL-7Ra). Inoltre, non si conosce ancora il correlato funzionale dell'asse IL-7/IL-7R in pazienti con grave deplezione CD4, sia in termini di signalling IL-7-mediato sia di neoproduzione/sopravvivenza/apoptosi T-linfocitaria. Scopo dello studio è caratterizzare l'asse IL-7/IL-7R ed il signalling IL-7-mediato in periferia e nel midollo osseo di pazienti HIV+ con grave deplezione CD4 con e senza HAART. L'assetto IL-7/IL-7R verrà inoltre correlato a parametri di timopoiesi e attivazione/apoptosi T-linfocitaria. IL-7/IL-7R verrà studiato su midollo osseo e sangue periferico di 20 pazienti seguiti presso la Clinica di Malattie Infettive previo consenso informato. Tra questi, 10 pazienti HIV+ con malattia avanzata naive alla HAART (CD4<200) e 10 immunological non responders (INRs): CD4<200, HIV-RNA<50cp/ml in corso di HAART. Come controlli verranno studiati 10 pazienti HIV-negatvi sottoposti a biopsia osteomidollare in corso di intervento di cardiochirurgia. Brevemente, i seguenti parametri verranno studiati su midollo osseo : 1) IL-7 su surnatante di cellule mononucleate di aspirato midollare (BMMC)(ELISA); 2) IL-7mRNA da BMMC (real-time PCR); 3) espressione citofluorimetrica e produzione di IL-7Ra su BMMC(CD127,real-time PCR). Verranno studiati in periferia: 1) IL-7 plasmatica, CD4+CD127+, CD8+CD127+ (citofluorimetria); 2) IL-7Ra mRNA (real-time PCR) su CD4+ e CD8+; 3) signalling IL-7 con e senza stimolazione con IL-7 in vitro (W-b di STAT, JAK, Bcl-2 in CD4+ e CD8+IL-7Ra+/-); 4) timopoiesi (CD4+/CD8+TREC+, real-time PCR); 5)fenotipo e apoptosi(CD45RA/R0/62L, annessina V CD4+/CD8+, citofluorimetria).