Valutazione dell'espressione di Survivin in placente umane patologiche e non, durante la gravidanza.

L'apoptosi è un processo cellulare intimamente coinvolto nella regolazione dell'omeostasi, della crescita e del rimodellamento della placenta. Survivin è una proteina della famiglia IAP (Inhibitor of Apoptosis Proteins) con peculiare funzione regolatrice del checkpoint G2/M del ciclo cellulare, facilitante la progressione del ciclo cellulare ed inibente nel contempo l'apoptosi indotta da stimoli sia endogeni che esogeni; inoltre, un importante ruolo nella regolazione dell'immunosorveglianza, in condizioni neoplastiche e non, è stato recentemente attribuito a questa proteina. Peculiarmente alti livelli proteici di Survivin sono riscontrabili nella placenta e nei tessuti embriofetali (ove è necessario per il loro armonico sviluppo), ma non nella maggior parte dei tessuti umani adulti. Un aumento dell'apoptosi è stato riscontrato in gravidanze patologiche con pre-eclampsia, ritardo di crescita fetale, diabete, e difetti di espressione di alcune proteine regolatrici dell'apoptosi, sono stati dimostrati in alcune di queste patologie. Scopo del presente studio è la valutazione dell'espressione del gene Survivin sia da un punto di vista proteico mediante immunoistochimica, che trascrizionale, con metodica real time RT-PCR, in una ampia serie di placente da gravidanze patologiche con noti dati clinico-patologici, non esistendo al momento dati in letteratura in merito. MATERIALI E METODI: casistica: 150 tessuti placentari d¿archivio inclusi in paraffina, con note patologie clinicamente seguite, di aborti spontanei e non, nel primo trimestre e nelle diverse fasi della gravidanza sino a parti a termine, cesarei e spontanei; 30 campioni tissutali di placente da gravidanze patologiche e non, congelate in azoto liquido e conservate a 80°C; metodi: 1a) immunoistochimica: metodica ABC standard con il kit LSAB (DAKO) eseguita con immunocoloratore automatico, utilizzando l'anticorpo policlonale diretto contro la proteina survivin (Novus Biologicals, Littleton, CO, 1:200) su sezioni istologiche di 5 micron di spessore, sistema di rivelazione Envision/HMP, cromogeno: DAB; 1b) real time RT-PCR (campioni congelati); 2) analisi statistica:opportune valutazioni statistiche per valutare la significatività: dei risultati immunoistochimici (previa analisi della sede nucleare e/o citoplasmatica dell'immunoreattività, dell'intensità e della percentuale di cellule immunoreattive) e dei livelli quantitativi del messaggero di Survivin con i dati clinico-patologici, correlazione dei dati immunoistochimici e molecolari dello studio. OBIETTIVI: -selezione e revisione dei casi d'archivio; -valutazione dell'espressione proteica di Survivin; valutazione quantitativa molecolare del messaggero di Survivin; -analisi statistica dei risultati.