Regolazione dei livelli del mRNA del recettore dell'epidermal growth factor da parte della vitamina B12 e del suo ligando epidermal growth factor nel fegato e nel rene di ratto

Presupposti: Da molti anni nel nostro laboratorio viene studiata la patogenesi della neuropatia da carenza di vitamina B12 (cobalamina (Cbl)). Abbiamo dimostrato che le lesioni mielinolitiche tipiche della neuropatia da carenza di Cbl sono causate non dalla mera carenza di Cbl ma dallo squilibrio nella produzione di fattori neurotossici e neurotrofici tra cui una diminuita sintesi nel midollo spinale (MS) dell'epidermal growth factor (EGF). Studi preliminari hanno dimostrato che la carenza di Cbl induce una diminuzione dei livelli del mRNA del recettore dell'EGF (EGFR) nel MS di ratto. Inoltre avendo dimostrato che il ruolo modulatorio della Cbl sui livelli di citochine e fattori di crescita con funzione trofica o tossica sul sistema nervoso centrale non coinvolge solo il MS, abbiamo ipotizzato che variazioni nei livelli del mRNA dell'EGFR possano accadere anche nel fegato (il principale organo di accumulo fisiologico della Cbl) e nel rene (uno dei principali organi di sintesi dell'EGF). Descrizione: Mediante analisi comparativa con real-time polimerase chain reaction e con ribonuclease protection assay determineremo i livelli del mRNA dell'EGFR nel fegato e nel rene dei ratti carenti in Cbl (o in quanto totalmente gastrectomizzati (TGX) o in quanto alimentati con dieta priva di Cbl). Per verificare se le eventuali variazioni riscontrate siano corrette dalla somministrazione sostitutiva della vitamina, tratteremo i ratti TGX con Cbl per i primi due mesi dopo la gastrectomia totale (GT) o per il terzo e il quarto mese dopo la GT e ridoseremo i livelli del mRNA dell'EGFR nel fegato e nel rene. Infine verificheremo se le stesse eventuali variazioni siano corrette dalla somministrazione di EGF ai ratti TGX seguendo gli stessi due schemi usati per la somministrazione sostitutiva di Cbl. Obiettivo: In questo studio verificheremo se la Cbl possa specificamente regolare i livelli del mRNA dell'EGFR nel fegato e nel rene di ratto. Verificheremo anche il ruolo della ridotta disponibilità di EGF causata dalla carenza di Cbl nella genesi delle anomalie dei livelli di mRNA dell'EGFR negli organi menzionati del ratto.