Identificazione e caratterizzazione di cellule tumorali circolanti (CTC) in pazienti sottoposti a chirurgia curativa per carcinoma del retto localmente avanzato.

Background- L'identificazione di CTC nel sangue venoso periferico (SP) in pazienti sottoposti a chirurgia colorettale per neoplasia, rappresenta un fattore di grande interesse prognostico e terapeutico, che tuttavia necessita di ulteriore validazione (Uen YH et al. 2008). A questo scopo si è costituito un protocollo integrato di ricerca e di monitoraggio sul ruolo delle CTC in pazienti con carcinoma del retto (CR) localmente avanzato e candidati a trattamento chirurgico radicale dopo terapia neoadiuvante. L'obiettivo è quello di definire: - parametri analitici della ricerca di CTC nel SP; - il valore prognostico delle CTC secondo indicatori di sopravvivenza; - il valore di campionamenti seriati durante il trattamento per la strategia terapeutica; Lo studio si propone inoltre di caratterizzare le CTC dal punto di vista Bio-molecolare al fine di investigare: - la presenza di sottopopolazioni cellulari nell'ambito delle CTC; - il profilo di espressione delle CTC e l'identificazione di nuovi target molecolari; - la staminalità e la sua rilevanza prognostica per la malattia metastatica delle sottopoplazione identificate. Metodi- Verranno arruolati 80 pazienti candidati a chirurgia radicale per CR afferenti alla Divisione di Chirurgia Generale e Laparoscopica dell'Istituto Europeo di Oncologia. Terapie multimodali neoadiuvanti (CT e RT) verrano effettuate presso la medesima Istituzione (IEO). I dati acquisiti verranno inseriti da personale dedicato in uno specifico Database. Lo studio sarà approvato dal comitato etico dell'IEO e la partecipazione sottoposta ad un consenso informato scritto. I campioni di SP verranno conservati presso l' Emoteca dell' Istituto Europeo di Oncologia e raccolti secondo lo schema seguente: 1) t0: precedente alla terapia neoadiuvante 2) t1: post neoadiuvante-pre chirurgia 3) t2: post chirurgia-preadiuvante 4) t3: post adiuvante 5) tn: follow-up I saggi verranno eseguiti in cieco attraverso un sistema automatizzato (Veridex, USA) che analizza la presenza di cellule nucleate CD45 negative che esprimono citocheratine. La caratterizzazione molecolare e l'allestimento di colture cellulari da CTC tessuti bioptici verrà effettuata presso i laboratori dell'IFOM IEO campus. In particolare verranno analizzate eventuali sottopopolazioni cellulari con caratteristiche di staminalità o maggiore potenziale metastatico. Risultati attesi- Questo progetto consentirà di definire il ruolo prognostico delle CTC in pazienti con CR ed il loro possibile utilizzo nel planning e nel monitoraggio di terapie neoadiuvanti e adiuvanti. Non ultimo, l' analisi dei risultati ottenuti consentirà di caratterizzare queste cellule dal punto di vista biologico, permettendo la definizione di pathway molecolari responsabili della progressione di malattia, l'isolamento di sottopopolazioni specifiche e l'identificazione di nuovi biomarcatori.