STUDIO DEI MECCANISMI ANTIFLOGISTICI DEL TIMOLO E DELL'EUGENOLO: AZIONE INIBITORIA SUL RILASCIO DI ELASTASI DA NEUTROFILI UMANI
Project PREMESSE. L¿elastasi è una serina-proteinasi rilasciata da neutrofili attivati in seguito a stimolazione da agenti chemotattici, componenti del complemento, endotossine, ecc., ed induce una degradazione della elastina, fibronectina, proteoglicani e proteine.
L¿elastasi viene attualmente considerarta come un marker delle patologie infiammatorie e la sua attività è regolata da alfa-PI, alfa-macroglobulina inibitoria e da leucoproteinasi.
Il timolo e l¿eugenolo sono molecole a struttura terpenica che hanno già dimostrato di possedere una attività antiflogistica in relazione alla loro capacità di antagonizzare i radicali ossidanti.
SCOPO DELLA RICERCA sarà quindi quello di valutare se queste molecole da sole od in associazione siano in grado di inibire anche la elastasi neutrofilica, avendosi così un duplice effetto sia sui radicali che sull¿elastasi.
METODI. I neutrofili verranno isolati da sangue umano mediante centrifugazione su gradiente di concentrazione(Polymorphprep). Verrà valutata la vitalità ed il grado di purezza della popolazione. Dopo attivazione con fMLP e PMA si procederà a misurare il rilascio di elastasi tramite una tecnica spettrofluorimetrica di misurazione della degradazione di un substrato fluorogenico: il MEO-Suc-Ala-Ala-Pro-Val-MCA (Perkin-Elmer LS 5).
Poiché lo starter per il rilascio di elastasi è costituito dalla mobilizzazione del Ca citosolico, tramite i canali del Ca, si procederà a misurare le variazioni dei livelli intracellulari del Ca mediante carico con Fura-2 e misurazione delle variazioni in fluorescenza. L¿azione del timolo e dell¿eugenolo da soli ed in associazione verrà indagata a concentrazioni crescenti da 2 a 20 microg/ml.
UTILITA¿.Poiché ricerche di questo tipo non sono ancora state eseguite, i dati ottenuti permetteranno di analizzare il meccanismo d¿azione di queste molecole a struttura terpenica e di valutare il loro grado di protezione antiinfiammatoria.