Tubulopatie renali ereditarie: ricerca di delezioni esoniche in eterozigosi nei quattro geni responsabili delle sindromi di Gitelman, di Bartter antenatale (tipo I e II) e tipo classico.

Presupposto: Le sindromi di Gitelman, di Bartter antenatale I e II, e tipo classico sono caratterizzate da perdita di sali, ipokalemia e alcalosi metabolica. Sono implicati 4 geni che codificano per proteine di membrana, canali o trasportatori epiteliali che partecipano al metabolismo degli elettroliti, Ca2+ e Mg2+. La trasmissione ereditaria è autosomica recessiva. La maggior parte delle mutazioni sono puntiformi, piccoli frameshift e varianti nei siti di splicing. Delezioni esoniche estese non sono state frequentemente documentate, eccetto nel tipo classico. Nella nostra casistica abbiamo ca 30% di soggetti affetti nei quali viene identificata una sola mutazione o che risultano negativi. Questi pazienti potrebbero essere portatori di delezioni esoniche, più o meno estese, in eterozigosi. Mentre le delezioni in omozigosi sono facilmente rilevabili (assenza di prodotto di PCR), le delezioni in eterozigosi non sono visibili con le techiche normalmente in uso e occorrono metodiche alternative. Esistono già diverse strategie alquanto complesse quali il Southern blot, il FISH, l'mRNA. Descrizione: Di recente è stato messo in commercio un kit "Multiplex ligation-dependent probe amplification" (MLPA) per il gene Gitelman. Si tratta di una PCR multipla che permette di amplificare in una singola reazione 25 sequenze nucleotidiche del gene corrispondenti a circa 96% del locus. Dopo ibridizzazione, ligasi e reazione di PCR, gli amplificati vengono sottoposti a elettroforesi su sequenziatore automatico. L'analisi del dato grezzo avviene usando un programma messo a disposizione dalla ditta fornitrice del kit. Obiettivo della ricerca: Approfondire con questa tecnica lo studio del gene Gitelman per completare la tipizzazione molecolare dei pazienti con una sola o nessuna mutazione e per eseguire studi di correlazione genotipo-fenotipo sui soggetti affetti.