Identificazione ed espresssione del gene codificante per alfa-L-fucosidasi dello spermatozoo di Ceratitis capitata

PRESUPPOSTI. Le basi molecolari del riconoscimento uovo/spermatozoo negli insetti non sono noti. La mancanza d¿informazioni è dovuta soprattutto al fatto che i gameti degli insetti non si prestano alle consuete metodiche di fertilizzazione in vivo utilizzate per altri organismi. In precedenza, noi abbiamo dimostrato la presenza nella membrana plasmatica dello spermatozoo di Drosophila melanogaster di glicosidasi simili a quelle che in altri organismi modello mediano le interazioni spermatozoo/superficie dell¿uovo, abbiamo identificato i geni che le codificano e ne abbiamo studiato l'espressione. OBIETTIVO. In uno studio recente svolto in Ceratitis capitata abbiamo dimostrato che anche in questo insetto la membrana plasmatica dello spermatozoo contiene due glicosidasi, beta-acetilesosamminidasi e alfa-L-fucosidasi, che hanno molte caratteristiche biochimiche in comune con quelle di Drosophila. Queste osservazioni suggeriscono che questi enzimi possano rappresentare un meccanismo generale di riconoscimento tra i gameti nei Ditteri. In questo programma di ricerca identificheremo il gene codificante per la alfa-L-fucosidasi e ne studieremo l¿espressione durante la spermatogenesi. I risultati potranno avere una ricaduta applicativa nell¿ambito di strategie mirate al controllo della riproduzione di questo insetto di rilevante importanza agro-economica. DESCRIZIONE. 1) Librerie normalizzate di cDNA da embrione e da testicolo di Ceratitis capitata, verranno messe a disposizione dalla Prof. A Malacrida dell' Università di Pavia 2) Verranno identificati i cloni di cDNA che, sulla base dell' analisi delle EST, mostrano omologie alla alfa-L-Fucosidasi espressa nel testicolo di Drosophila melanogaster. 3) L¿espressione del gene di Ceratitis capitata così identificato verra' studiata nel testicolo mediante RT-PCR, Northern blotting ed ibridazione in situ 4) identificheremo le sequenze che caratterizzano i domini funzionali di questo enzima.Tali sequenze saranno succesivamente adoperate per la sintesi di peptidi sintetici e la produzione di anticorpi policlonali da utilizzare per lo studio dell'espressione delle proteine enzimatiche durante la spermatogenesi mediante microscopia in fluorescenza e microscopia elettronica.