REGOLAZIONE DEI LIVELLI DEL RECETTORE PER LA TRANSCOBALAMINA, DELLA CUBILINA E DELLA MEGALINA DA PARTE DELLA VITAMINA B12 (COBALAMINA) IN DIFFERENTI ORGANI DEL RATTO

Presupposti: L¿assorbimento della vitamina B12 (anche detta cobalamina (Cbl)) dagli alimenti avviene a livello degli enterociti ileali mediante il recettore per il complesso Cbl-fattore intrinseco (FI), denominato cubilina (CUB). Il legame di tale recettore alla membrana dell¿enterocita avviene mediante la megalina (MG). All¿interno degli enterociti la Cbl si stacca dal FI e si lega alla transcobalamina (TC) formando il complesso Cbl-TC. Quest¿ultimo viene poi secreto nel sangue e da questo trasportato, ed infine si lega al recettore specifico (TC-R) presente sulla superficie delle cellule non intestinali. Descrizione: Utilizzeremo i modelli dei ratti carenti in Cbl in seguito a gastrectomia totale (GT) o ad alimentazione cronica con dieta priva di vitamina B12. Questi ratti verranno uccisi a differenti tempi sperimentali. Mediante analisi ¿Western blot¿ misureremo i livelli della proteina del TC-R nel rene, nel fegato, nella mucosa duodenale e nel midollo spinale di ratti carenti in Cbl. Con lo stesso metodo misureremo i livelli delle proteine della CUB e della MG nel rene, nel fegato e nella mucosa ileale dei ratti carenti in Cbl. Per verificare la specificità delle eventuali variazioni osservate, somministreremo la vitamina B12 per via sottocutanea ai ratti totalmente gastrectomizzati secondo lo schema a (durante i primi due mesi dopo la GT) o quello b (durante il terzo e quarto mese dopo la GT) e ri-doseremo negli stessi organi i livelli delle tre proteine (TC-R, CUB e MG). Questi due schemi differiscono tra loro, in quanto nel primo la somministrazione di vitamina B12 avviene durante il tempo in cui insorgono le lesioni neuropatologiche, nel secondo la somministrazione è successiva all¿instaurarsi delle lesioni stesse. Utilizzeremo anche le cellule di adenocarcinoma umano del colon (Caco-2) coltivate in vitro poichè esse esprimono le proteine del TC-R e della CUB nella membrana basolaterale. Tratteremo le cellule Caco-2 per 4 ore con tumour necrosis factor(TNF)-alpha a diverse concentrazioni e ri-determineremo i livelli delle proteine del TC-R e della CUB, in quanto abbiamo dimostrato che la vitamina B12 modula la sintesi del TNF-alpha nell¿uomo e nel ratto. Obiettivo delle ricerca: Verificheremo se la carenza di Cbl possa modificare specificamente i livelli cellulari dei suoi recettori (la TC-R, la CUB e la MG) in alcuni organi del ratto e se eventuali anomalie possano essere mediate da un aumento dei livelli di TNF-alpha.