L'analisi del genoma di riso usando una sequenza altamente conservata della dineina di Chlamydomonas ha permesso di identificare quattro diversi frammenti riconducibili ad altrettante catene pesanti di dineina (DHCs) ed un frammento genico di 310 pb è stato clonato e sequenziato in tabacco. Due polipeptidi correlati con le DHCs sono stati identificati in tubetti pollinici come parte di complessi proteici con costanti di sedimentazione di 22S e 12S. La proteina 12 S da tubetti pollinici di tabacco è stata purificata e la catena pesante sottoposta a sequenziamento tramite spettometria di massa. Sono stati sequenziati 6 frammenti aminoacidici che mostrano omologia con le dineine note in altri organismi. Obiettivi della ricerca:
1-Costruire primers specifici per amplificare e sequenze geniche usando come stampo DNA ed mRNA purificati da foglie e da tubetti pollinici di tabacco. I frammenti genici ottenuti saranno sequenziati per sequenziamento diretto usando un apparecchio Mega BACE 500 (Amersham).
2-Analisi funzionali del complesso proteico 12S purificato da tubetti pollinici. L'approccio sperimentale sarà condotto attraverso esperimenti di binding su HSS di tubetti pollinici, usando Mts stabilizzati con taxolo, in assenza di ATP. I polipeptidi legati ai Mts saranno poi indotti a staccarsi incubando i pellets di Mts con ATP e NaCl. In saggi di movimento in vitro la proteina 12S sarà fatta aderire ad un vetrino portaoggetti e successivamente Mts nucleati a partire da assonemi di Chlamydomonas estratti con ATP/NaCl e tubulina purificata saranno posti sul coprioggetto già ricoperto dalla 12S. L'aggiunta di ATP nella camera di perfusione dovrebbe mostrare l'abilità della 12S nel promuovere la traslocazione di Mts con polarità nota verso la loro estremità positiva o negativa.