ATTIVITA' ANTINEOPLASTICA DELLA MELATONINA CONVENZIONALE E VEICOLATA IN NANOSFERE LIPIDICHE SOLIDE

Recentemente sono stati messi a punto nuovi metodi di veicolazione dei farmaci basati su nanoparticelle lipidiche preparate con diverse matrici, che possono essere caricate con farmaci lipofili e idrofili. Le nanoparticelle sono state studiate per migliorare l¿indice terapeutico, la biodisponibilitá e per proteggere la mucosa gastrointestinale dalla tossicitá di molecole a somministrazione orale. Sono state messe a punto nanoparticelle a matrice lipidica ottenute da microemulsione a caldo veicolanti melatonina, con dimensioni comprese tra 70 e 200 nm, che possono essere facilmente captate dalle cellule, come dimostrato in precedenti studi. È noto che la melatonina (MLT), principale ormone secreto in modo circadiano dalla ghiandola pineale, esercita azione antineoplastica e antiossidante. È altresì noto che l¿azione antiossidante della MLT non è mediata dai sottotipi recettoriali di membrana MT1 e MT2. Scopo del presente progetto è confrontare l¿attivitá neoplastica della melatonina convenzionale (MLT) e veicolata in nanoparticelle lipidiche solide (MLT-SLN) in differenti modelli ¿in vitro¿ e di verificare se tale azione coinvolga i sottotipi recettoriali di membrana o si esplichi attraverso una modulazione dello stress ossidativo, generalmente elevato nelle cellule tumorali. Verranno utilizzate colture di linee cellulari umane normali (PNT1A), di tumore prostatico (LNCaP, DU145, PC3) e mammario (MCF-7). Lo studio verrá articolato nei seguenti punti: -analisi dell¿espressione dei sottotipi recettoriali MT1e MT2 sulle cellule tumorali; -modulazione della attivazione delle vie di segnale intracellulari (MAPK-ERK1/2 e P13K-Akt); -motilitá cellulare e invasione della matrice. L¿analisi della espressione dei recettori verrà attuata attraverso la valutazione della espressione genica (Real-Time PCR) e proteica (Western-blotting). La proliferazione cellulare, la progressione del ciclo cellulare e l¿apoptosi verranno valutati mediante incorporazione di ¿rdU e citofluorimetria. La modulazione di vie di segnale intracellulari rilevanti per la progressione tumorale verrá determinata mediante immmunoblot analisi e densitometria. La motilitá cellulare verrà valutata in camera per microchemiotassi di Boyden e l¿invasione della matrice con tecnica di invasione Matrigel. Il coinvolgimento dei recettori di membrana verrà studiato con l¿uso di analoghi antagonisti della MLT e anticorpi. La penetrazione intracellulare di melatonina verrá verificata a vari tempi nelle diverse linee cellulari in gas-cromatografia/Spettrometria di massa.