Identificazione e studio funzionale del promotore del gene codificante la proteina Zar1-like (zygote arrest 1-like)

Nel nostro laboratorio è stato isolato il cDNA codificante una nuova proteina bovina, chiamata Zar1-like perché strutturalmente correlata alla Zar1. Ricerche in silico hanno dimostrato che il gene Zar1-like è presente in tutti i vertebrati e la sua struttura è molto conservata e simile a quella descritta per il gene Zar1. L¿analisi della proteina dedotta suggerisce che si localizzi nel nucleo e qui svolga una funzione probabilmente correlata alla capacità di legarsi al DNA, indicata dalla presenza di un motivo strutturale del tipo zinc-finger (manoscritto in preparazione). Abbiamo ragione di ritenere che l¿espressione di questo gene sia sottoposta ad una raffinata regolazione, sia a livello di trascrizione, come suggerito dal fatto che l¿mRNA è presente in un numero molto limitato di tessuti, sia a livello di traduzione, per la presenza nel 5¿ non tradotto di elementi tipicamente legati ad una più o meno marcata inibizione della sintesi della proteina. I nostri progetti di ricerca riguardano l¿approfondimento di entrambi questi meccanismi di regolazione.
Lo scopo della presente ricerca è identificare il promotore minimo del gene Zar1-like bovino e possibilmente elementi di regolazione della trascrizione. Poiché riteniamo di avere isolato la regione 5¿-leader completa del cDNA, verranno innanzitutto preparati costrutti con sequenze genomiche di varia lunghezza, localizzate a monte del 5¿-leader. Tali sequenze, inserite in un plasmide contenente un gene reporter, verranno trasfettate in cellule eucariotiche adatte, in modo da poter eseguire dei saggi funzionali.