Caratterizzazione delle cellule staminali neurali (NSC) del topo durante il differenziamento, in base al pattern di espressione dei canali del calcio voltaggio-dipendenti (VDCC) e all¿identificazione dei relativi mRNA.
ProgettoI flussi di calcio attraverso la membrana plasmatica giocano un ruolo fondamentale nella vita di tutte le cellule nervose. I Cav sono composti da varie subunità: una subunità principale, a che rappresenta il poro canale, il sensore di voltaggio e i meccanismi di porta e altre subunità a funzione regolatrice di a o sconosciuta. La subunità a è distinguibile in tre sottofamiglie Cav 1, Cav 2, Cav 3, a cui corrispondono rispettivamente le correnti di calcio tipo L, P/Q N e R, e T. (2) Cav 1, responsabile delle correnti L, può essere implicato nella regolazione della trascrizione genica (in particolare i sottotipi Cav 1.2 e Cav 1.3) e potrebbe avere un ruolo nella differenziazione delle cellule staminali in neuroni. Non possiamo tuttavia escludere che anche Cav 2, Cav 3 o qualche altra subunità regolatrice possano avere un qualche ruolo durante la differenziazione delle cellule staminali.
Con la tecnica del patch-clamp whole-cell saranno studiate le NSC provenienti dalla zona subventricolare e dal midollo spinale di giovani topi adulti CD1. Sarà verificata la presenza dei diversi tipi di VDCC (L, N, P/Q, R e T) in base alle caratteristiche biofisiche e per mezzo degli specifici bloccanti. (nifedipina, *-Conotoxin GVIA, *-Agatoxin IVA) La caratterizzazione elettrofisiologica dei VDCC sarà integrata dall¿analisi dei mRNA relativi alle isoforme delle subunità che compongono i VDCC. Utilizzando lo stesso microelettrodo da patch-clamp sarà prelevato l¿mRNA di ciascuna cellula registrata che sarà analizzato (nel laboratorio del Prof. Gorio) con la tecnica di single-cell RT-PCR per il rilevamento simultaneo degli mRNA relativi alle svariate isoforme delle subunità che compongono i VDCC.
Obiettivo della ricerca è di utilizzare i dati elettrofisiologici e bio-molecolari insieme per individuare l¿esatto pattern di espressione dei canali del calcio voltaggio-dipendenti (Cav) delle cellule staminali durante il loro differenziamento in neuroni e confrontare le staminali di origine cerebrale e midollare da questo importante punto di vista.
Con la tecnica del patch-clamp whole-cell saranno studiate le NSC provenienti dalla zona subventricolare e dal midollo spinale di giovani topi adulti CD1. Sarà verificata la presenza dei diversi tipi di VDCC (L, N, P/Q, R e T) in base alle caratteristiche biofisiche e per mezzo degli specifici bloccanti. (nifedipina, *-Conotoxin GVIA, *-Agatoxin IVA) La caratterizzazione elettrofisiologica dei VDCC sarà integrata dall¿analisi dei mRNA relativi alle isoforme delle subunità che compongono i VDCC. Utilizzando lo stesso microelettrodo da patch-clamp sarà prelevato l¿mRNA di ciascuna cellula registrata che sarà analizzato (nel laboratorio del Prof. Gorio) con la tecnica di single-cell RT-PCR per il rilevamento simultaneo degli mRNA relativi alle svariate isoforme delle subunità che compongono i VDCC.
Obiettivo della ricerca è di utilizzare i dati elettrofisiologici e bio-molecolari insieme per individuare l¿esatto pattern di espressione dei canali del calcio voltaggio-dipendenti (Cav) delle cellule staminali durante il loro differenziamento in neuroni e confrontare le staminali di origine cerebrale e midollare da questo importante punto di vista.