Stress ossidativo e modificazioni post-traduzionali delle proteine. La S-glutationilazione delle proteine citoscheletriche di membrana negli eritrociti umani.

Le modificazioni ossidative delle proteine possono essere indotte direttamente da specie reattive dell¿ossigeno (ROS) o indirettamente da reazioni con prodotti secondari dello stress ossidativo.
In condizioni di stress ossidativo moderato, i gruppi tiolici proteici possono formare disolfuri misti con il glutatione (S-glutationilazione), producendo proteine glutationilate (PSSG). La S-glutationilazione è considerata anche un possibile meccanismo di regolazione redox-dipendente della attività di alcune proteine.
Aumenti di PSSG sono stati recentemente dimostrati in patologie umane associate allo stress ossidativo quali iperlipidemia, atassia di Friedreich, diabete mellito, ed insufficienza renale cronica. PSSG sono anche state evidenziate nel sangue dei fumatori. Negli eritrociti, l¿emoglobina è particolarmente sensibile alla S-glutationilazione. Di conseguenza, è stato proposto che l¿emoglobina S-glutationilata possa essere utilizzata come biomarker pre-sintomatico in alcune patologie umane, quali il diabete.
Scopo del progetto è di identificare altre eventuali proteine negli eritrociti umani che possono subire S-glutationilazione. In particolare, si valuterà la S-glutationilazione delle proteine citoscheletriche di membrana e, in caso affermativo, si tenterà di chiarire i meccanismi biochimici che portano alla S-glutationilazione negli eritrociti.
Gli eritrociti saranno esposti a condizioni ossidanti fisiologicamente e patologicamente rilevanti. Le proteine S-glutationilate saranno evidenziate mediante 1D o 2D-PAGE ed immunoblotting con anticorpi anti-glutatione. Le PSSG verranno identificate mediante redox-proteomica e spettrometria di massa. La glutationilazione delle singole proteine sarà misurata quantitativamente mediante RP-HPLC.