L¿ oocita di Xenopus laevis è la cellula maggiormente utilizzata nelle tecniche di espressione funzionale di proteine eterologhe e la caratterizzazione dei suoi meccanismi endogeni di trasporto rappresenta un dato indispensabile per tali studi.
L¿oocita è una cellula glicogenica ed i maggiori substrati utilizzati sono lattato e piruvato; tuttavia la loro elevata concentrazione cellulare non può essere attribuita alla glicolisi, la cui attività è molto ridotta in questa cellula. Studi condotti nel nostro laboratorio (Tosco et al., 2000) hanno evidenziato la presenza, nella membrana plasmatica dell¿oocita, di un trasportatore endogeno per l¿L-lattato con alcune proprietà funzionali simili ai trasportatori di monocarbossilati appartenenti alla famiglia genica MCT (Halestrap & Meredith, 2004). La sua identità molecolare non è ancora stata definita.
Scopo di questo progetto è valutare i possibili meccanismi cellulari coinvolti nella regolazione dell¿attività del trasportatore endogeno. Un¿eventuale modulazione del trasporto di lattato operata da protein chinasi potrebbe avere un significato fisiologico nei profondi mutamenti metabolici che accompagnano lo sviluppo dell¿oocita e la sua maturazione in cellula uovo.
Gli oociti, isolati e defollicolati mediante trattamento con collagenasi, saranno utilizzati per esperimenti di uptake con 14C-L-lattato. Per valutare un¿eventuale regolazione del trasportatore da parte di PKC e PKA, gli oociti saranno trattati con attivatori e inibitori delle chinasi e delle fosfatasi. Si indagherà il coinvolgimento del citoscheletro nell¿espressione del trasportatore e nella sua modulazione da parte delle chinasi. Si analizzerà infine il ruolo del calcio nel processo di regolazione.
Halestrap A. P., Meredith D. Pflugers Arch-Eur. J. Physiol. 447, 619-628, 2004.
Tosco M., Orsenigo M.N., Gastaldi G., Faelli A. Am. J. Physiol. 278, R1190-R1195, 2000. 278, R1190-1195, 2000.
L¿oocita è una cellula glicogenica ed i maggiori substrati utilizzati sono lattato e piruvato; tuttavia la loro elevata concentrazione cellulare non può essere attribuita alla glicolisi, la cui attività è molto ridotta in questa cellula. Studi condotti nel nostro laboratorio (Tosco et al., 2000) hanno evidenziato la presenza, nella membrana plasmatica dell¿oocita, di un trasportatore endogeno per l¿L-lattato con alcune proprietà funzionali simili ai trasportatori di monocarbossilati appartenenti alla famiglia genica MCT (Halestrap & Meredith, 2004). La sua identità molecolare non è ancora stata definita.
Scopo di questo progetto è valutare i possibili meccanismi cellulari coinvolti nella regolazione dell¿attività del trasportatore endogeno. Un¿eventuale modulazione del trasporto di lattato operata da protein chinasi potrebbe avere un significato fisiologico nei profondi mutamenti metabolici che accompagnano lo sviluppo dell¿oocita e la sua maturazione in cellula uovo.
Gli oociti, isolati e defollicolati mediante trattamento con collagenasi, saranno utilizzati per esperimenti di uptake con 14C-L-lattato. Per valutare un¿eventuale regolazione del trasportatore da parte di PKC e PKA, gli oociti saranno trattati con attivatori e inibitori delle chinasi e delle fosfatasi. Si indagherà il coinvolgimento del citoscheletro nell¿espressione del trasportatore e nella sua modulazione da parte delle chinasi. Si analizzerà infine il ruolo del calcio nel processo di regolazione.
Halestrap A. P., Meredith D. Pflugers Arch-Eur. J. Physiol. 447, 619-628, 2004.
Tosco M., Orsenigo M.N., Gastaldi G., Faelli A. Am. J. Physiol. 278, R1190-R1195, 2000. 278, R1190-1195, 2000.