Allestimento di database bidimensionali di ceppi di M. paratuberculosis e di sieri di bovini con paratubercolosi

La paratubercolosi è una malattia cronica, che provoca infiammazione intestinale negli animali, che induce forme di diarrea e rallentamento della crescita. E¿ causata dal Mycobacterium avium subsp. paratuberculosis (MAP) che appare in netto aumento in tutta Europa negli allevamenti di bovini, caprini ed ovini. Nell¿uomo, l¿infezione da MAP, responsabile della paratubercolosi dei ruminanti, viene indicato come uno dei principali fattori predisponenti l¿insorgenza della malattia di Crohn. Diverse sono le segnalazioni della presenza nel latte pastorizzato di MAP. La diagnosi del MAP risulta complicata dalla mancanza di test in grado di identificare correttamente un soggetto o a un alimento infetto (manca allo stato attuale un gold test che offra risultati in tempi brevi). I metodi di coltura dalle feci sono laboriosi, lenti e costosi, e legati alle tecniche di estrazione dei batteri dalle feci. A tale proposito l¿approccio proteomico può costituire un valido sistema per la ricerca di nuovi marcatori diagnostici; tuttavia la complessità strutturale, ed in particolare l¿alto contenuto in cere della parete, costituiscono un problema da risolvere. Con questo lavoro si intende confrontare differenti protocolli di estrazione delle proteine di MAP per ottenere una separazione elettroforetica bidimensionale ottimale in grado di distinguere il maggior numero di proteine espresse dal MAP. Verranno pertanto confrontati metodi chimici (delipidazione e precipitazione) e metodi fisici (French Press) di estrazione proteica; le proteine risolte in bidimensionale verranno collezionate in un database comune che comprenda tutte le proteine rilevabili dai due sistemi e successivamente verranno identificati gli epitopi antigenici (immunoblotting) con i sieri di bovini infetti a differenti stadi della malattia. Le proteine riconosciute dagli anticorpi verranno successivamente caratterizzate con spettrometria di massa o microsequenziamento.