DETERMINAZIONE DELL¿EFFICACIA DI COMPOSTI NGF-MIMETICI NELLA PREVENZIONE DEL DANNO APOPTOTICO INDOTTO DA ISCHEMIA-RIPERFUSIONE NEL RENE

Lo studio delle proprietà del Nerve Growth Factor (NGF) ha fornito solidi dati che ne presuppongono l¿uso in diverse condizioni patologiche. Sono disponibili alcune strutture chimiche che possiedono caratteristiche che le rendono idonee ad interagire con i siti di legame del recettore ad alta affinità per NGF. Alcune di queste molecole possiedono attività anti-apoptotica su numerosi tipi cellulari. Il meccanismo molecolare alla base dell¿attività anti-apoptotica è identico a quello esercitato dal NGF. L¿intero pathway molecolare attivato da NGF e dai composti NGF-mimetici previene la fosforilazione e consente pertanto la corretta funzione di Bcl-2, proteina essenziale nell¿inibire l¿apoptosi indotta da qualunque stimolo che alteri i valori di permeabilità mitocondriale. Attraverso la fosforilazione di AkT vengono invece attivate vie anti-apoptotiche più tardive che passano dalla attivazione di NF-KB e dall¿induzione genica. Il razionale di questo studio è dato dalla presenza di recettori su cellule endoteliali, cellule glomerulari e cellule endoteliali e dalla già nota attività anti-apoptotica di NGF e dei composti su cellule endoteliali sottoposte ad ischemia/riperfusione.In questa ricerca preclinicaci proponiamo di valutare se i composti siano in grado di prevenire l¿apoptosi delle cellule endoteliali, delle cellule epiteliali tubulari e delle cellule glomerulari in corso di ischemia-riperfusione del rene. Metodiologia Verranno utilizzati ratti outbred sottoposti a: · clampaggio dell¿ilo renale bilateralmente (20 minuti) · riapertura flussi · trattamento i.v. con una dose di NGF mimetico calcolata considerando sia il volume di distribuzione intracellulare che extracellulare sia l¿attività massimale dei composti nei test già eseguiti in vivo ed in vitro sacrificio dopo 4 ore e dopo 24 ore dalla riperfusione. Prima del sacrificio saranno prelevati campioni ematici per il dosaggio di creatinina, urea ed NO. I reni degli animali trattati e del gruppo di controllo verranno in parte inclusi in paraffina per l¿esame istopatologico EE e per la valutazione del grado di apoptosi mediante la metodica del Tunel