L¿omeostasi dello stato redox cellulare è cruciale per la modulazione dei meccanismi di segnale.
Le cellule tumorali, rispetto a quelle normali, presentano, in genere, un persistente stress ossidativo, proliferazione incontrollata e resistenza all¿apoptosi.
I risultati fino ad ora ottenuti hanno confermato la modulazione della proliferazione cellulare da parte delle specie reattive dell¿ossigeno intracellulari. Infatti, melatonina e acido a-lipoico, sostanze endogene coinvolte nei meccanismi di difesa antiossidanti, hanno inibito la proliferazione delle linee cellulari tumorali in modo dose e tempo dipendente mentre la proliferazione delle cellule normali è stata modificata solo a concentrazioni elevate e a tempi lunghi. Nelle linee cellulari tumorali trattate con acido a-lipoico è stata osservata una alterazione dell¿espressione di fattori coinvolti nella cascata apoptotica (riduzione di Bcl-2 e incremento di P53) rispetto ai controlli. Il trattamento con acido a-lipoico ha determinato, nelle linee cellulari tumorali, un blocco del ciclo cellulare in G1 e, a concentrazioni elevate, morte cellulare per apoptosi e necrosi
Scopo del presente progetto è proseguire lo studio ¿in vitro¿ del ruolo dello stato redox cellulare nella modulazione delle vie di segnale di ciclo cellulare, proliferazione, sopravvivenza.
Lo studio verrà focalizzato su due linee cellulari umane, una normale (fibroblasti) e una tumorale (MCF-7) caratterizzata da elevato stress ossidativo..
In particolare verrà studiato l¿effetto sulla modulazione dell¿attività di effettori dell¿apoptosi (caspasi) e sulla attivazione di fattori coinvolti nelle vie di segnale (famiglia delle MAP kinasi, ERK 1/2). La proliferazione cellulare verrà valutata con metodi colorimetrici e analisi citofluorimetrica del ciclo cellulare. L¿attività delle caspasi sarà analizzata con metodi spettrofotometrici e Western-Blot/elettroforesi e l¿attivazione di ERK 1/2 tramite Western Blot e densitometria a scansione.