ATTIVITA¿ DELLA MELATONINA E DEI SUOI ANALOGHI SINTETICI, VEICOLATI O MENO IN NANOSFERE, SU PROLIFERAZIONE CELLULARE E APOPTOSI
ProjectScopo del presente progetto è quello di proseguire lo studio dell'azione che la melatonina ed i suoi analoghi agonisti ed antagonisti esercitano sulla proliferazione di linee cellulari tumorali umane e di verificare se tale azione sia mediata dai sottotipi recettoriali di membrana o si esplichi attraverso una modulazione dello stresso ossidativo, notoriamente elevato nelle cellule tumorali.
Verranno valutati gli effetti della melatonina e dei suoi analoghi, veicolati o meno in nanoparticelle lipidiche solide ottenute da microemulsione a caldo, su proliferazione e apoptosi in linee cellulari umane tumorali (MCF-7) e normali (fibroblasti).
Sulle stesse linee cellulari verrà inoltre valutato l'effetto protettivo della melatonina e dei suoi analoghi nei confronti dello stress ossidativo sperimentalmente indotto con H2O2.
Le linee cellulari utilizzate saranno caratterizzate per la presenza o meno dei sottotipi recettoriali della melatonina allo scopo di correlare l¿attività farmacologica delle sostanze testate con l¿espressione recettoriale.
La proliferazione cellulare verrà investigata mediante MTT, il ciclo cellulare e l¿apoptosi verranno studiate con opportuna analisi citofluorimetrica.
L¿attività delle caspasi verrà indagata con metodi spettrofotometrici e Western blot.
L¿attività di Bcl-2 e p53, fattori coinvolti nella cascata apoptotica e sensibili allo stato redox cellulare, verrà analizzata con metodo ELISA, utilizzando kits commerciali.
L¿attività antiossidante verrà valutata attraverso la determinazione dei gruppi tiolici e dei ROS intracellulari, mediante analisi spettrofotometrica, utilizzando kit commerciali.
L'effetto protettivo nei confronti dello stress ossidativo indotto da H2O2 verrà valutato mediante l'analisi delle alterazioni delle strutture proteiche e degli enzimi tramite spettrometria di massa di separati proteici.
Verranno valutati gli effetti della melatonina e dei suoi analoghi, veicolati o meno in nanoparticelle lipidiche solide ottenute da microemulsione a caldo, su proliferazione e apoptosi in linee cellulari umane tumorali (MCF-7) e normali (fibroblasti).
Sulle stesse linee cellulari verrà inoltre valutato l'effetto protettivo della melatonina e dei suoi analoghi nei confronti dello stress ossidativo sperimentalmente indotto con H2O2.
Le linee cellulari utilizzate saranno caratterizzate per la presenza o meno dei sottotipi recettoriali della melatonina allo scopo di correlare l¿attività farmacologica delle sostanze testate con l¿espressione recettoriale.
La proliferazione cellulare verrà investigata mediante MTT, il ciclo cellulare e l¿apoptosi verranno studiate con opportuna analisi citofluorimetrica.
L¿attività delle caspasi verrà indagata con metodi spettrofotometrici e Western blot.
L¿attività di Bcl-2 e p53, fattori coinvolti nella cascata apoptotica e sensibili allo stato redox cellulare, verrà analizzata con metodo ELISA, utilizzando kits commerciali.
L¿attività antiossidante verrà valutata attraverso la determinazione dei gruppi tiolici e dei ROS intracellulari, mediante analisi spettrofotometrica, utilizzando kit commerciali.
L'effetto protettivo nei confronti dello stress ossidativo indotto da H2O2 verrà valutato mediante l'analisi delle alterazioni delle strutture proteiche e degli enzimi tramite spettrometria di massa di separati proteici.