Mutazioni di Doublecortin (dcx), un gene localizzato sul cromosoma X (q22;Q23), sono causa di una patologia caratterizzata da alterazioni della corticogenesi, ed associata ad epilessia, ritardo mentale, ridotta aspettativa di vita. La proteina DCX é localizzata nel corpo cellulare, nei processi guida di neuroni migranti, negli assoni di neuroni in fase di differenziamento. L'espressione di GFP-DCX (una forma chimerica di DCX con la Green Fluorescence Protein GFP), evidenzia che essa colocalizza con la tubulina; le cellule esprimenti DCX presentavano un aumento dell'organizzazione delle strutture microtubulari con una caratteristica associazione al fuso mitotico durante la divisione cellulare.
In questo progetto verra' analizzato il ruolo svolto da DCX e dalla sua forma mutata, nei meccanismi molecolari che possono portare ad alterazioni della migrazione cellulare. Verranno analizzati: a) Il ruolo specifico di alcuni componenti del citoscheletro, e di alcune proteine ad esso associate nella migrazione neuronale e nell'allungamento assonale verra' valutato mediante diversi approcci sperimentali; b) verranno saggiati sulle cellule nervose gli sia gli effetti di farmaci e di tossine in grado di modificare l'organizzazione del citoscheletro (es. taxolo, citocalasina B, nocodazolo) sia di agenti differenzianti (es. acido retinoico, TPA, ecc); c) verranno effettuati studi statici sull'organizzazione di actina, tubulina, filamenti intermedi e di proteine motrici verranno condotti con tecniche di immunofluorescenza. La visualizzazione della trama filamentosa ed alterazioni nella dinamica dell'assemblaggio dei microtubuli verra' seguita in cellule vive tramite cotrasfezione di GFP-DCX con RFP-tubulina e/o RFP-actina. La trama del citoscheletro in queste cellule fissate, verra' visualizzata con diversi anticorpi e reagenti. Gli effetti di DCX sulla motilita' cellulare verranno esaminati usando camera di Zigmod e la camera di Boyden.