NUOVE STRATEGIE PER L¿ANALISI MOLECOLARE DEL GENE PORFOBILINOGENO DEAMINASI (PBGD) IN PAZIENTI AFFETTI DA PORFIRIA ACUTA INTERMITTENTE (AIP)
Project La Porfiria Acuta Intermittente (AIP) è un disordine autosomico dominante causato da difetti nel gene porfobilinogeno deaminasi (PBGD o HMBS) codificante il terzo enzima della via biosintetica dell¿eme. E¿ verosimilmente la più comune tra le forme acute di Porfiria ed e¿ caratterizzata da un¿ampia eterogeneità genetica che rende molto difficile una corretta diagnosi molecolare. Infatti, circa nel 20% dei casi di AIP non si documenta il difetto molecolare. Inoltre ad oggi sono state descritte solo mutazioni puntiformi e piccole inserzioni-delezioni nella regione codificante del gene PBGD. Cio¿ potrebbe essere dovuto al fatto che le tecniche molecolari comunemente utilizzate non permettono l¿identificazione di mutazioni particolari come grosse delezioni o riarrangiamenti cromosomici.
L¿obiettivo di questo studio e¿ quello di:
1) effettuare l¿analisi molecolare di pazienti con sospetto clinico di AIP per identificare le mutazioni piu¿ frequenti ed eventuali nuove mutazioni caratteristiche della popolazione italiana per la quale sono disponibili ancora pochi dati.
2) implementare nuove strategie per l¿identificazione di difetti molecolari in pazienti con sintomatologia clinica e biochimica di AIP ma con apparente regione codificante wild-type del gene PBGD.
A tale scopo, in tutti i pazienti riferiti alla nostra unità, riconosciuta come riferimento nazionale per la diagnosi molecolare di Porfiria, viene analizzata la regione codificate e le giunzioni di splicing del gene PBGD mediante PCR e Sequenziamento diretto. Mutazioni puntiformi verranno confermate con Restriction Fragment Length Polymorphisms e mutazioni a livello dei siti di splicing verranno verificate con analisi dell¿RNA. Piccole delezioni¿inserzioni verranno invece verificate con Poly-Acrylamide Gel Electrophoresis. Nei pazienti in cui non si identificasse il difetto molecolare lo studio sarà completato con la Multiplex Ligation-dependent Probe Amplification assay, la XL-PCR e il chromosome walking.