CORRELAZIONE GENOTIPO-FENOTIPO NELLA SINDROME DA MICRODELEZIONE NF1: RICERCA DI GENI CANDIDATI PER IL RITARDO MENTALE E LE MALFORMAZIONI CARDIACHE
Project La Sindrome da microdelezione NF1 è dovuta alla mancanza di una copia del gene NF1 e geni fiancheggianti. Abbiamo evidenziato mediante studi di correlazione genotipo-fenotipo la presenza significativa di ritardo mentale (RM) e anomalie cardiovascolari (AC) nei pazienti (pz) NF1 microdeleti, rispetto ai pz con NF1 classica. Questi studi hanno promosso la ricerca di geni della regione 17q11.2 implicati nell¿insorgenza del RM e delle AC.
Nella regione mappano 4 geni espressi durante lo sviluppo del sistema nervoso centrale fra cui CDK5R1 e OMG, per i quali è stata intrapresa un¿analisi mutazionale in pz con RM aspecifico. In entrambi i geni sono state identificate nuove mutazioni e nuovi polimorfismi, sia nella regione codificante che negli UTR. E¿ stato inoltre intrapreso uno studio funzionale di elementi regolatori (ER) post-trascrizionali, predetti nel 3¿UTR di CDK5R1, potenziali bersagli di mutazioni patogenetiche. Esperimenti basati su saggi di Dual Luciferase hanno permesso di identificare regioni del 3¿UTR di CDK5R1 che diminuiscono o aumentano l¿attività luciferasica. Per quanto riguarda la ricerca di geni implicati nello sviluppo del cuore abbiamo studiato il profilo di espressione di 9 geni che mappano nella regione deleta. L¿espressione dei geni JJAZ1, CENTA2 e HCA66 osservata sin dalle prime fasi di sviluppo del cuore, ha promosso studi d¿ibridazione in situ (ISH) whole-mount su embrione di topo che hanno evidenziato l¿espressione di CENTA2 nel cuore durante la formazione delle quattro camere. Obiettivi del progetto proposto sono quindi: 1) generare costrutti deleti degli ER predetti e identificare nuovi ER mediante saggi Dual Luciferase, mutagenesi, cotrasfezione con oligonucleotidi antisenso e gel shift; 3) studiare l¿espressione di Centa2 mediante ISH ed immunoistochimica su sezioni di cuore di embrioni di topo a diversi stadi di sviluppo, estendendo l¿analisi a zebrafish, per stabilire la distribuzione del trascritto nei diversi distretti cardiaci.