IDENTIFICAZIONE DI EPITOPI ANTIGENICI DI PROTEINE DI FUSIONE PER IMMUNOTERAPIA TUMORALE DELLA LEUCEMIA MIELOIDE CRONICA

Nella leucemia mieloide cronica (CML), le cellule midollari sono portatrici del Cromosoma Philadelphia (Ph+), risultato della traslocazione t9;22, dei geni ABL e BCR e che origina trascritti ibridi codificanti per proteine indispensabili per la trasformazione cellulare esclusive delle cellule leucemiche. Nel punto di giunzione si possono originare peptidi potenzialmente immunogeni perché non presenti nelle cellule sane che possono essere presentati in associazione alle molecole HLA ed essere riconosciuti dai linfociti T. Ora l¿approccio immunologico alla CML è limitato a specifici pazienti e ad alcuni tipi di alleli MHC, in quanto solo la sequenza peptidica del punto di giunzione bcr-abl che è in grado di legarsi a uno specifico tipo di HLA presente nell¿ospite, risulta essere immunogenica. Accanto alle proteine di fusione abl-bcr, possono esserci altri trascritti, derivanti da splicing alternativi tra gli esoni dei geni coinvolti nel riarrangiamento in cui la cornice di lettura non è mantenuta (¿out of frame¿: OOF) e quindi le proteine ibride prodotte sono costituite da un numero variabile di aminoacidi originatisi dallo sfasamento della cornice di lettura, completamente diversi dal gene ABL fisiologico, quindi potenzialmente utilizzabili per indurre una risposta specifica antitumorale. L¿intento è l¿elaborazione di un vaccino tumore-specifico che sfrutti l¿antigenicità di queste proteine di fusione alternative.Utilizzeremo topi transgenici per la molecola HLA A-2.1 che è tra le più diffuse e per identificare gli epitopi antigenici dell¿abl OOF in grado di essere presentati da HLA A-2.1, selezioneremo le sequenze peptidiche immunogene in base all¿affinità di legame con l¿MHC utilizzando algoritmi. L¿induzione di una risposta CD8+ sarà analizzata valutando l¿attività citotossica dei linfociti con test del cromo, dosaggio dei granzimi e produzione di interferone g, mentre rileveremo gli Ab specifici con test ELISA e di citotossicità anticorpo-mediata.