Regolazione dell'espressione del recettore dell¿epidermal growth factor da parte della vitamina B12 nel sistema nervoso centrale di ratto

Presupposti: Nel nostro laboratorio è stato messo a punto il modello sperimentale del ratto totalmente gastrectomizzato (TGX) per studiare la patogenesi della neuropatia da carenza di vitamina B12 (cobalamina (Cbl)) dell'uomo. Utilizzando il ratto TGX, abbiamo dimostrato che le lesioni mielinolitiche del midollo spinale (MS), riscontrabili nella neuropatia da carenza di Cbl, sono causate non dalla mera carenza della Cbl ma dall'aumentata sintesi di fattori neurotossici (quali il TNF-alpha) e dalla ridotta sintesi di fattori neurotrofici (quali l'EGF) nel MS. E' stato ipotizzato che la carenza di Cbl possa indurre direttamente o indirettamente anomalie anche a livello del recettore dell¿EGF (EGFR). Descrizione: Mediante analisi con real time PCR e mediante RNasi protection assay (RPA)(un saggio di ibridazione in fase liquida) determineremo i livelli del mRNA dell¿EGFR nel MS dei ratti carenti in Cbl (o in quanto TGX o in quanto alimentati con dieta priva di Cbl). Verificheremo anche se eventuali variazioni quantitative dei livelli di EGFR siano corrette dalla somministrazione di Cbl ai ratti TGX per i primi due mesi dopo la gastrectomia totale (GT) o per il terzo e il quarto mese dopo la GT, cioè dopo che le lesioni del MS si sono instaurate. Infine, verranno analizzate al microscopio confocale sezioni ultrafini del MS di ratti Cbl-deficienti per individuare le localizzazioni cellulari degli EGFR. A questo fine verranno utilizzati anticorpi specifici (marcati con diversi fluorocromi) sia per l'EGFR sia per i principali tipi di cellule del MS (neuroni, astrociti, oligodendrociti). Obiettivo: In questo studio verificheremo se la Cbl possa regolare i livelli sia della positività immunoistochimica dell'EGFR sia degli mRNA dell'EGFR nel MS di ratto e se eventuali anomalie dell'espressione degli EGFR siano dovute ad una diversa localizzazione cellulare del recettore, ad una variazione del numero dei cellule che esprimono il recettore o alla variazione del numero di recettori per cellula.