STUDIO DELL¿ EFFETTO DEI COMPOSTI PROGESTINICI SULLA MIGRAZIONE ENDOMETRIALE E IDENTIFICAZIONE DELLE VIE BIOCHIMICHE COINVOLTE
ProjectRAZIONALE: I composti progestinici derivati dal 19-nortestosterone o dal 17-idrossiprogesterone vengono utilizzati per il trattamento della sintomatologia associata ad endometriosi essendo ben tollerati, poco costosi e con scarsi effetti collaterali. Benché la loro farmacocinetica, farmacodinamica e gli effetti clinici siano ben noti, le basi biologiche della loro efficacia sono sconosciute. Peraltro, non è noto se alla diversa efficacia terapeutica dei diversi derivati non corrispondano diverse caratteristiche di tipo biofunzionale. La migrazione cellulare rappresenta un processo coordinato utilizzato dalle cellule endometriotiche per diffondere e invadere lo strato peritoneale. Il processo è regolato da una serie di prodotti genici e di vie biochimiche. L¿effetto dei composti progestinici su questo evento è sconosciuto.
OBIETTIVI: In questo studio verrà utilizzato un modello di migrazione cellulare per valutare la capacità di diversi preparati progestinici di influenzare la migrazione e invasione della matrice extracellulare da parte delle cellule endometriali. Inoltre, verrà indagato il ruolo di diversi fattori di crescita e citochine e il coinvolgimento di alcune vie biochimiche (ERK1/2, PI3K) nel fenomeno.
MATERIALI E METODI:
· Campioni di endometrio verranno ottenuti in corso di laparoscopia per indicazioni ginecologiche benigne previo consenso informato. Le cellule stromali saranno ottenute mediante digestione enzimatica e cresciute secondo procedura standard.
· Le cellule saranno sottoposte a trattamenti con diversi progestinici (medrossiprogesterone acetato, ciproterone acetato, noretindrone e progesterone) in presenza e assenza di vari fattori di crescita e citochine.
· La migrazione cellulare verrà valutata tramite camera di Boyden che misura la capacità delle cellule di migrare attraverso uno strato di collagene IV.
· L¿attivazione delle vie biochimiche verrà esaminata tramite western blotting con anticorpi specifici fosforilati e non.
OBIETTIVI: In questo studio verrà utilizzato un modello di migrazione cellulare per valutare la capacità di diversi preparati progestinici di influenzare la migrazione e invasione della matrice extracellulare da parte delle cellule endometriali. Inoltre, verrà indagato il ruolo di diversi fattori di crescita e citochine e il coinvolgimento di alcune vie biochimiche (ERK1/2, PI3K) nel fenomeno.
MATERIALI E METODI:
· Campioni di endometrio verranno ottenuti in corso di laparoscopia per indicazioni ginecologiche benigne previo consenso informato. Le cellule stromali saranno ottenute mediante digestione enzimatica e cresciute secondo procedura standard.
· Le cellule saranno sottoposte a trattamenti con diversi progestinici (medrossiprogesterone acetato, ciproterone acetato, noretindrone e progesterone) in presenza e assenza di vari fattori di crescita e citochine.
· La migrazione cellulare verrà valutata tramite camera di Boyden che misura la capacità delle cellule di migrare attraverso uno strato di collagene IV.
· L¿attivazione delle vie biochimiche verrà esaminata tramite western blotting con anticorpi specifici fosforilati e non.