La proteina ICln è caratterizzata da una forma solubile citosolica, contenente un PH domain [1], e da una forma di membrana, dove funziona come canale [2].
Riicostituendo la proteina ICln ¿[87-108] (priva del loop mobile nel PH domain) in membrane lipidiche artificiali formate da sfingomielina è stato mostrato che la forma deleta in esame perde la capacità di dare luogo a un canale funzionale.
Ci proponiamo di analizzare il comportamento della corrente mediata dalla proteina canale ICln isolata dal contesto cellulare e ricostituita in membrane lipidiche artificiali macroscopiche (black lipid bilayer). In particolare, analizzeremo eventuali variazioni nel comportamento e nelle caratteristiche biofisiche di alcune forme delete rispetto alla proteina wt e ad ICln ¿[87-108] in membrane formate da una miscela di sfingomieline.
In particolare, esamineremo la funzionalità delle seguenti forme delete:
ICln159 (regione N-terminale troncata all¿AA 159, la cui struttura in forma solubile è stata determinata mediante NMR) e ICln159 ¿[88-103], per verificare se sia in grado di formare un canale funzionante e per studiare le caratteristiche della corrente da esso mediata;
ICln134, corrispondente al solo PH domain;
ICln ¿AD2 (proteina priva del secondo Dominio Acido) e ICln159 ¿AD2, per esaminare il ruolo di AD2.
Riferimenti bibliografici
[1] J.Furst, A.Schedlbauer, R.Gandini, M.L.Garavaglia, S.Saino, M.Gschwentner, B.Sarg, H.Lindner, M.Jakab, M.Ritter, C.Bazzini, G.Botta, G.Meyer, G.Kontaxis, B.C.Tilly, R.Konrat, M.Paulmichl, ICln159 folds into a PH-domain like structure: Interaction with kinases and the splicing-factor LSm4 J.Biol.Chem.(2005) M500541200.
[2] M.L.Garavaglia, S.Rodighiero, C.Bertocchi, R.Manfredi, J.Furst, M.Gschwentner, M.Ritter, C.Bazzini, G.Botta, M.Jakab, G.Meyer, M.Paulmichl, ICln channels reconstituted in heart-lipid bilayer are selective to chloride Pflugers Arch. 443, (2002) 748-753.