DOSAGGIO DI TESTOSTERONE ED ESTRADIOLO IN PLASMA UMANO MEDIANTE SPETTROMETRIA DI MASSA CON LA TECNICA DELLA DILUIZIONE ISOTOPICA

Presupposti. Studi hanno dimostrato che testosterone (Te), ormone sessuale maschile ed estradiolo (E2), estrogeno femminile, controllano stati patologici, indipendentemente dal sesso, come cancro delle ovaie il testosterone, cardiopatie e metabolismo osseo l¿estradiolo. Sia il Te che l¿E2 esistono nel plasma legati ad una globulina (Sex-Hormone Binding Globulin), legati all¿albumina e in piccola percentuale in forma libera. Solo i livelli della forma libera e legata all¿albumina rappresentano il Te ed l¿E2 realmente accessibile ai tessuti. Nei laboratori clinici, i livelli plasmatici di Te ed E2, sia nelle loro forma libera e/o totale sono valutati mediante test immunologici, criticati per la loro bassa sensibilità e specificità. Poiché tali ormoni esercitano la loro attività biologica in concentrazioni nano o pico molare, è importante disporre di ¿metodi quantitativi di riferimento¿ per il loro corretto dosaggio. Descrizione ed obiettivo della ricerca. Si intende mettere a punto un metodo di riferimento specifico e sensibile per dosare le diverse forme di testosterone ed estradiolo nel plasma di uomini e donne. In una prima fase, si procederà alla sintesi chimica degli standard interni di testosterone ed estradiolo deuterati. Successivamente si studieranno le migliori condizioni d¿idrolisi, estrazione, purificazione e derivatizzazione di Te ed E2 in plasma umano. Le analisi quantitative saranno effettuate con uno spettrometro di massa accoppiato ad un gas cromatografo (GC/MS) o a un cromatografo in fase liquida (LC/MS); la scelta dello strumento avverrà sulla base della massima sensibilità ottenibile. Risultati attesi. Ci si attende di realizzare un metodo di riferimento che permetta di valutare la concentrazione delle diverse forme di testosterone ed estradiolo, nel plasma di soggetti sani o affetti da patologie. Il metodo verrà inoltre utilizzato per la validazione di metodiche analitiche di routine usate nei laboratori clinici per il dosaggio di questi ormoni.