ACQUISIZIONE DELLA COMPETENZA ALLO SVILUPPO DELL¿OVOCITA DI BOVINO: AMBIENTE FOLLICOLARE E SISTEMI GIUNZIONALI

Studi recenti fanno supporre che la scarsa efficienza delle tecniche di riproduzione assistita sia legata soprattutto dalla ¿qualità¿ dell¿ovocita, intesa come sua capacità di svilupparsi in vitro dopo fecondazione. Con questo progetto s¿intende quindi indagare sui possibili meccanismi che controllano la qualità del gamete femminile. Le ricerche saranno condotte nel bovino, scelto come modello sperimentale, poiché studi condotti anche nel nostro laboratorio hanno evidenziato che, in questa specie, è possibile conoscere a priori la capacità di un ovocita di svilupparsi in vitro a partire dalla morfologia dell¿ovaio di provenienza. S¿intende quindi studiare l¿espressione e la localizzazione della connessine 43 e 37, due proteine trans-membrana che costituiscono i sistemi giunzionali presenti nei follicoli ovarici. L¿ovocita e il compartimento somatico sono, infatti, in contatto tramite una fitta rete di giunzioni specializzate di tipo gap (Gap Junction-GJ) che permettono il trasferimento di nutrienti e messaggeri cellulari, indispensabili per la crescita del gamete femminile e la sua acquisizione della competenza allo sviluppo. Questi studi verranno condotti mediante tecniche di immunofluorescenza indiretta e, dove applicabile, microscopia confocale. Si valuteranno sia sezioni di follicoli antrali del diametro compreso fra i 2-6 mm che complessi ovocita cumulo-ooforo ¿whole mount¿ provenienti da ovaie raccolte in sede di macellazione e divise in due gruppi in base al numero di follicoli antrali presenti sulla corticale (n 50/gruppo). Si valuterà inoltre la morfologia dei follicoli e il loro livello d¿apoptosi mediante Tunel, ai fini di correlare la qualità dell¿ovocita e il grado di atresia del follicolo di provenienza all¿interno del modello sperimentale considerato. I risultati delle ricerche apporteranno nuove conoscenze sia alla ricerca di base che a quella applicata alla riproduzione assistita.