Presupposti.
Il gene HLA-B35 è stato associato ad una più rapida progressione dell¿infezione da HIV (1) e allo sviluppo di ipertensione polmonare isolata nei pazienti affetti da sclerosi sistemica.(2). L¿apoptosi è uno dei meccanismi determinanti nelle suddette patologie. Recentemente abbiamo dimostrato come linee cellulari umane ECV304, cellule polimorfonucleate umane circolanti e fibroblasti murini esprimenti l¿antigene HLA-B35 presentano una aumentata suscettibilità all¿apoptosi da taxolo e/o da tapsigargina (3), attivatori della via apoptotica da stress. Le molecole coinvolte in tale via sono molteplici: Bax, famiglia delle BCL2, citocromo C e caspasi 9 e la successiva cascata delle caspasi.
Obiettivo.
Valutare quale via di attivazione cellulare risulti determinante nella suscettibilità allo stimolo apoptotico nelle cellule B35+ve.
Metodi
Nello studio verranno impiegate linee cellulari ECV304 umana, NIH3T3 murina, transfettate stabilmente con l¿antigene di classe prima HLA-B35; come controllo sono adoperate linee cellulari transfettate con l¿antigene di classe I HLA-B8 o le linee transfettate con il solo vettore (pIRES Neo2). Tali linee cellulari sono già disponibili presso il nostro laboratorio e sono state impiegate Dopo stimolo apoptotico con taxolo, sia il citocromo C, sia le molecole pro-apoptotiche (p53, BAX) che le caspasi considerate (caspasi 9, caspasi 3, caspasi 6) verranno quantificate mediante RT-PCR e kit ELISA specifici.
1. Scorza Smeraldi R, et al. HLA-associated susceptibility to acquired immunodeficiency syndrome in Italian patients with human-immunodeficiency-virus infection. Lancet. 1986;2:1187-9.
2. Scorza R, et al. Post-menopause is the main risk factor for developing isolated pulmonary hypertension in systemic sclerosis. Ann N Y Acad Sci 2002;966:238-46.
3. Salazar G, [¿], Scorza R. HLA-B35 influences the apoptosis rate in human peripheral blood mononucleated cells and HLA transfected cells. Human Immunol 2006 (in press).