Caratterizzazione dei fattori estrinseci per il mantenimento dello stato indifferenziato di cellule staminali embrionali di suino

Dati preliminari ottenuti nel nostro laboratorio hanno dimostrato che siamo in grado di ottenere cellule embrionali staminali (ESC) suine sia da embrioni generati in vivo che in vitro (1, 2). Al momento però non sono ancora stati identificati i fattori esogeni che mantengono le ESC indifferenziate a lungo termine. Tali fattori infatti cambiano da specie e specie. Le ESC di topo necessitano della presenza di un monostrato di fibroblasti fetali o della citochina LIF in presenza di BMP-4. Le ESC umane invece mantengono il loro stato indifferenziato anche in assenza di LIF, ma in presenza di b-FGF. Ci si propone di verificare il ruolo di LIF e b-FGF per il mantenimento della pluripotenza delle ESC suine. Le ESC verranno coltivate in presenza di di LIF e b-FGF aggiunti nel medium di coltura singolarmente o in diverse combinazioni. Gli esperimenti verranno eseguiti sia in condizioni standard coltivando le ESC su monostrati di fibroblasti fetali di topo o sostituendo queste cellule con gelatina di maiale. Questo ha lo scopo di sviluppare un sistema di coltura privo di cellule di altra specie al fine di evitare `accumulo di antigeni di superficie interspecifici che aumenterebbero la risposta anticorpale in seguito ad un eventuale trapianto in vivo. L¿effetto delle diverse combinazioni di coltura verrà determinato misurando il tempo di duplicazione cellulare e controllando l¿espressione dei marcatori di pluiripotenza Oct-4 e Nanog sia a livello di mRNA che di proteina. In entrambe le condizioni sperimentali verrà analizzata anche l¿espressione dei geni che codificano per i recettori per LIF e b-FGF per determinare se siano presenti le vie di mediazione del segnale. Si studierà inoltre l¿espressione del fattore di trascrizione STAT3 che è stato identificato nel topo come fondamentale nel mantenimento della pluripotenza. 1. Brevini, T. A. L., Cillo, F. & Gandolfi, F.(2005) Reprod Fertil Dev 17:231 2. BREVINI, T. A. L. et al. (2006)XXVI Cong E.A.V.A. Messina